酸化血清中に存在する細胞傷害因子の探索-新規酸化ストレスマーカーの同定を目指して

寻找氧化血清中存在的细胞毒性因子 - 旨在识别新的氧化应激标记物

• 批准号: 16790079
• 负责人: 斎藤 芳郎
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790079/
• 关键词: 酸化ストレス; 酸化リポタンパク質; 過酸化脂質; 酸化ストレスマーカー; カルボニルタンパク質; ヒト動脈内皮細胞(HAEC); ヒト平滑筋細胞(AoSMC); 接着分子; カルボニル蛋白質; ヒト動脈平滑筋細胞(AoSMC)

1.酸化血清中の血管細胞増殖因子の同定前年度の結果から、酸化血清中に含まれる過酸化脂質が主要な血管細胞増殖因子として機能する可能性が考えられた。このことを証明するため、脂質を除去した血清(Lipoprotein Deficient Serum以下LPDS)を作成し検討した。ヒト血清にKBrを加え、超遠心を行い、上層にリポタンパク質画分を、下層にLPDS画分を得た。透析して得られたLPDSをラジカル酸化剤を用いて酸化し、酸化LPDSを作成し、AKTAクロマトグラフィーを用いてゲルろ過で分離した。分離したフラクションを、前年度確立したバイオアッセイ系で評価した。48穴プレートに、ヒト動脈内皮細胞(HAEC)やヒト動脈平滑筋細胞(AoSMC)などのヒト由来血管細胞を播種し、分離したフラクションをくわえた。各画分を添加して、24〜72時間培養後、生細胞数をMTT法を用いて測定した。その結果、高分子画分に認められた増殖因子が消失した。さらに、低比重リポタンパク質(LDL)を同様に酸化し、得られた酸化LDLを血管細胞に添加した結果、類似の細胞増殖が認められた。以上の結果から、酸化血清中の主要な細胞増殖因子は、酸化LDLに由来することがわかった。酸化ストレスと動脈硬化との関係において、重要な知見が得られた。酸化LDLの測定系に関しは、当ヒューマンストレスシグナル研究センターの酸化脂質ストレスマーカーtHODE、t7-OHChとの相関性について検討を行っている。また、これまで我々の研究室で認められた酸化LDL添加により当電点が変化するタンパク質の解析を行っている。2.接着分子の発現に及ぼす影響さらに、酸化血清の作用について、細胞表面への接着分子の発現に及ぼす影響について解析した。方法は同一で、得られた酸化血清フラクションを血管細胞に添加後、フローサイトメーターを用いて接着分子の発現量を定量した。その結果、生細胞数への影響とは異なるとこにピークが認められた。今後、この分子の同定を行っていきたい。

1. The results of vascular cytokines in acidified serum were the same as those in the previous year, and the possibility of vascular cytoplasmic factors in acidified serum was tested. Make sure that the serum (LPDS below Lipoprotein Deficient Serum) is removed and made into a mixture of fat and fat. The serum KBr was added, the heart test was performed, the score was drawn on the top, and the LPDS score was obtained on the bottom. After dialysis, LPDS was used to acidify acid, acidified LPDS was used to make acid, and AKTA was used to separate from each other. Separate from each other and make sure that in the previous year, you will make sure that you are in a position to make sure that you are in a position to pay attention. 48. The endothelial cell (HAEC), endothelial cell (HAEC), smooth muscle cell (AoSMC) and vascular cell (AoSMC) were seeded and separated from each other. After each drawing was added and cultured at 24: 72, the number of raw cells was measured by MTT method. The result of the experiment, the separation of the polymer painting and the disappearance of the colonization factor. Low specific gravity, low specific gravity, low specific gravity, The above results showed that the main cytokines and acidified LDL in acidified serum were significantly higher than those in control group. Acidizing, chemical hardening, chemical hardening, and important knowledge. The acidified LDL was used to determine the performance of the system, and when the acidified fat was studied, the phase properties of the tHODE and t7-OHCh were analyzed. In the laboratory, we are required to acidify the LDL and add it to the power plant. two。 Then the molecule was detected and the effect of acidified serum was detected, and then the cell surface was detected and then the molecule was detected and the protein was analyzed. Methods the same drug was used to acidify the serum. After the blood vessel cell was added, the blood vessel cell was added and the molecule was used to quantify the quantity. The results and the number of birth cells were affected by the number of babies. From now on, the molecules will agree to make sure that they will do the same.