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抗炎症脂質N-アシルエタノールアミンを加水分解する新規リソソーム酵素の機能解析

水解抗炎脂质 N-酰基乙醇胺的新型溶酶体酶的功能分析

基本信息

批准号：
16790173
负责人：
坪井一人
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

アナンダミドをはじめとする長鎖脂肪酸のエタノールアミド(N-アシルエタノールアミン,NAE)は,虚血脳や心筋梗塞などの病変部位で著しく増加し,鎮痛や抗炎症などの多彩な生体作用を発揮する脂質メディエーターである。動物組織においてNAEの生体内レベルの調節に関与する加水分解酵素としては,中性からアルカリ性で働く脂肪酸アミド加水分解酵素の研究が先行している。一方,同様の反応をもっぱら酸性条件で触媒するアイソザイム(N-アシルエタノールアミン水解酸性アミダーゼ,NAAA)についての解析は遅れている。本研究課題の初年度においてNAAAのリコンビナント酵素の性状解析を行ったが,2年目にあたる本年度は,NAAAの強い発現が明らかになっているマクロファージにおける同酵素の機能に焦点を当て,以下の成果を得た。RT-PCR法により,RAW264.7など種々のマクロファージ様細胞でFAAHとともにNAAAのmRNA発現を認めた。また,NAAA選択的阻害剤(N-シクロヘキサンペンタデシルアミン)とFAAH選択的阻害剤(URB597)を用いることで,RAW264.7細胞のホモジネートに,NAAAとFAAHの両酵素によるアナンダミド加水分解活性を認めた。さらに,浮遊細胞を用いて細胞外から加えたアナンダミドなどの種々のNAEの分解活性を測定したところ,活性は前述のNAAA選択的阻害剤およびFAAH選択的阻害剤でそれぞれ部分的に阻害され,両者の併用によりさらに高い阻害効果を認めた。以上の結果から,マクロファージにおいて,NAAAとFAAHが協調してアナンダミドを含むNAEを加水分解することが示唆された。本研究は,従来もっぱらFAAHで説明されてきたマクロファージにおけるNAEの代謝に,新しい観点を提示するものである。

There is a lot of pain in the area of deficiency blood, heart infarction, heart infarction, pain, anti-inflammation, multi-color, body, fat, fat, blood, heart, body, body and body. The animal tissue was used to determine the concentration of hydrolytic enzyme in vivo and the addition of water-decomposing enzyme in vivo, and the neutral enzyme was used in the study of fatty acid and hydrolytic enzyme. On one side, the same as the acid condition catalyst, the acid condition catalyst, the acid catalyst. In the first year of this study, the characteristics of enzyme were analyzed in the first year of this study. in the first year of this study, the characteristics of isozymes were analyzed in the first year of this study. in the first year of this study, the characteristics of isozymes were analyzed in the first year of this study. in this study, the characteristics of isozymes were analyzed in the first year of this study. the following results are successful. The RT-PCR method has been verified, and the NAAA mRNA has been recognized by the RAW264.7 method, and the NAAA method has been verified. The URB597 of the NAAA-selected URB597, the RAW264.7-selected enzyme, the NAAA-FAAH enzyme, the hydrolyzed enzyme, the hydrolytic activity. The temperature of the cell is determined by the decomposition activity of the extracellular NAE, the active NAAA selected by the above-mentioned blocking agent, the blocking device selected by the FAAH, the blocking device selected by the FAAH, and the active cell, which is verified by the high-level blocking effect. The results of the above results show that the results show that the NAAA FAAH coordination protocol does not contain any information about NAE plus water decomposition. The purpose of this study is to tell you that you need to know that you are in the process of FAAH. In this study, you need to know that you are going to have a problem in this study. In this study, you need to know that you are going to have a problem in this study. In this study, you will be prompted by the new information that you need to know that you are not in the market.