アナンダミドを水解する酸性アミダーゼの機能と生理的役割に関する分子生物学的研究

水解花生四烯酸酰胺酶的功能和生理作用的分子生物学研究

基本信息

  • 批准号:
    18790205
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.18万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
  • 财政年份:
    2006
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2006 至 2007
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

長鎖脂肪酸のエタノールアミド(N-アシルエタノールアミン,NAE)は,虚血脳や心筋梗塞などの病変部位で著しく増加し,抗炎症作用を発揮する脂質メディエーターである。NAEのひとつであるアナンダミドは,カンナビノイド受容体の内因性リガンドであることも知られている。NAEの生体内レベルの調節に関与するNAE分解酵素としては,中性からアルカリ性で働く脂肪酸アミド加水分解酵素がよく知られているが,我々は最近,同じ反応をもっぱら酸性条件で触媒するアイソザイム(N-アシルエタノールアミン水解酸性アミダーゼ,NAAA)の遺伝子クローニングに成功した。本研究課題において平成18年度は,当該酵素の特異抗体を初めて作製し,免疫化学的解析を行い以下の成果を得た。作製した抗体の特異性を,組換えNAAA発現細胞を用いてWestern blottingにより確認した。ラット肺胞マクロファージや肺から単離したNAAAを同法で解析したところ,本酵素は糖蛋白であり,ペプチド鎖の限定分解を受けることが判明した。次に肺胞マクロファージを用いて免疫染色を行い,蛍光顕微鏡で観察したところ,本酵素はリソソームに局在していた。さらに,ラット肺の組織切片の免疫染色を行った結果,NAAA陽性細胞は主としてマクロファージであった。この結果に一致して,肺から単離した肺胞マクロファージは肺組織全体と比べて,はるかに高いNAAAの比活性と蛋白およびmRNAの発現レベルを示した。また,腹腔マクロファージにも強い発現が認められた。次に,ラット脳の免疫組織染色の結果,NAAA陽性細胞は,主として脳室内のマクロファージであった。一方,ミクログリアは陰性であった。以上の結果から,NAAAはラット組織中の種々のタイプのマクロファージで強く発現していることが明らかとなり,炎症や組織変性の場で蓄積するNAEの分解に貢献することが考えられた。
Long locks fatty acids の エ タ ノ ー ル ア ミ ド (N - ア シ ル エ タ ノ ー ル ア ミ ン, NAE) は, empty blood 脳 や heart muscle infarction な ど の ill - position で the し く raised し, antiinflammatory effects を 発 swing す る lipid メ デ ィ エ ー タ ー で あ る. NAE の ひ と つ で あ る ア ナ ン ダ ミ ド は, カ ン ナ ビ ノ イ ド by let body の endogenous リ ガ ン ド で あ る こ と も know ら れ て い る. NAE の born in vivo レ ベ ル の adjust に masato and す る NAE decomposition enzyme と し て は, neutral か ら ア ル カ リ sex で 働 く fatty acids ア ミ ド hydrolysis enzyme が よ く know ら れ て い る が, I 々 は recently, with じ anti 応 を も っ ぱ ら で す the catalyst acidity condition る ア イ ソ ザ イ ム (N - ア シ ル エ タ ノ ー ル ア ミ ン acid hydrolysate ア ミ ダ ー ゼ, N AAA) Cultural heritage: 伝, ロ, ニ, グに, success: た. This research topic に お い て pp.47-53 は 18 year, when at the beginning of the enzyme の specific antibody を め て as し, immunochemical analysis line を い の results under を た. To prepare the <s:1> antibody with <s:1> specificity を, the え naaa-activated cells を were exchanged, and the <s:1> てWestern blottingによ <s:1> was used to confirm the た. ラ ッ ト lung cell マ ク ロ フ ァ ー ジ や lung か ら 単 from し た NAAA を with the method of analytical し で た と こ ろ, this enzyme は glycoprotein で あ り, ペ プ チ ド lock の finite decomposition を by け る こ と が.at し た. Lung cell に マ ク ロ フ ァ ー ジ を with い い て immune dyeing を line, light 蛍 顕 micromirror で 観 examine し た と こ ろ, this enzyme は リ ソ ソ ー ム に bureau in し て い た. さ ら に, ラ ッ ト の lung biopsy の immune dyeing line を っ た results, NAAA positive cells は main と し て マ ク ロ フ ァ ー ジ で あ っ た. こ の に consistent し て, pulmonary か ら 単 from し た lung cell マ ク ロ フ ァ ー ジ は all と lung tissue than べ て, は る か に high い NAAA の than active と protein お よ び mRNA の 発 now レ ベ ル を shown し た. Youdaoplaceholder0, abdominal cavity また ロファ ジに ジに また strong また occurrence が recognition められた. The results of the first に,ラット脳 <s:1> immunostaining <e:1> of the tissue, naAA-positive cells に, main と <s:1> て脳 room <s:1> に ジであった ジであった ジであった ジであった ジであった. One party, ログリア ログリア ログリア negative であった. の above results か ら, NAAA は ラ ッ ト organization の kind 々 の タ イ プ の マ ク ロ フ ァ ー ジ で strong く 発 now し て い る こ と が Ming ら か と な り, inflammation や groups - sex の accumulation of field で す る NAE の decomposition に contribution す る こ と が exam え ら れ た.

项目成果

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专利数量(0)
Functional analysis of the purified anandamide-generating phospholipase D as a member of the metallo-β-lactamase family
  • DOI:
    10.1074/jbc.m512359200
  • 发表时间:
    2006-05-05
  • 期刊:
  • 影响因子:
    4.8
  • 作者:
    Wang, J;Okamoto, Y;Ueda, N
  • 通讯作者:
    Ueda, N
Predominant expression of lysosomal N-acylethanolamine-hydrolyzing acid amidase in macrophages revealed by immunochemical studies
Discovery and characterization of a Ca^<2+> -independent phosphatidylethanolamine N-acyltransferase generating anandamide precursor and its congeners
产生anandamide前体及其同源物的Ca ^ 2 -独立的磷脂酰乙醇胺N-酰基转移酶的发现和表征
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Jin;X.-H.et al.
  • 通讯作者:
    X.-H.et al.
Molecular characterization of a novel lysosomal enzyme degrading the anti-inflammatory lipid mediator N-acylethanolamine
降解抗炎脂质介质 N-酰基乙醇胺的新型溶酶体酶的分子表征
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坪井 一人其他文献

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  • 发表时间:
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  • 期刊:
  • 影响因子:
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  • 作者:
    坪井 一人;宇山 徹;上田 夏生
  • 通讯作者:
    上田 夏生
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  • DOI:
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2018
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    坪井 一人;宇山 徹;上田 夏生;井上貴雄
  • 通讯作者:
    井上貴雄
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  • DOI:
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  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    北風 圭介;坪井 一人
  • 通讯作者:
    坪井 一人
肺線維症で増加するgrowth/differentiation factor 15 (GDF15) が線維化へ及ぼす影響
生长/分化因子 15 (GDF15) 会增加肺纤维化,对纤维化的影响
  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
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  • 作者:
    竹之内康広;坪井 一人;北風 圭介;岡本安雄
  • 通讯作者:
    岡本安雄

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  • 发表时间:
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  • 作者:
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  • 通讯作者:
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