リポ蛋白代謝及び動脈硬化発生におけるアポ蛋白AIIの役割

アポ蛋白A-II(アポAII)は高比重リポ蛋白(HDL)の約25%を占める主要アポ蛋白であり、主に肝臓で合成される。しかし、アポAIIの生理機能および動脈硬化との関係はまだ解明されてない。本研究では、リポ蛋白代謝および動脈硬化の発生におけるアポAIIの直接的役割、病理的意義を明らかするために、ヒトアポAII遺伝子は本来アポAIIを有していないウサギに導入することによって、アポAIIを発現するトランスジェニック(Tg)ウサギの作製を目的とした。本年度では肝臓で特異的に発現するアポEプロモーターを有する発現ベクターとヒトアポAII c DNAとを構築した。それを用いて、876個のウサギ受精卵に注入し、28羽の仮親ウサギに移植した。得られた59羽の仔ウサギのうち、4羽がポジであった。ウサギの血清をSDS-PAGEで分析したところ、2羽のウサギはヒトアポAII蛋白を発現していることが確認された。さらに、ELISA法にて血清のアポAIIの濃度を測定した。トランスジェニックウサギのアポAIIの濃度は〜5mg/dlでヒトより低いことがわかりました。また、超遠心法によりヒトアポAIIはウサギのHDLに存在していることも確認されています。現在これらのTgウサギを用いて、コレステロール食投与実験によりアポAIIの動脈硬化の発生・進展における役割を検討している。今後、アポAII発現レベルの高いFounderウサギの作製を計画している。

アポ蛋白A-II(アポAII)は高比重リポ蛋白(HDL)の約25%を占める主要アポ蛋白であり、主に肝臓で合成される。しかし、アポAIIの生理機能および動脈硬化との関係はまだ解明されてない。本研究では、リポ蛋白代謝および動脈硬化の発生におけるアポAIIの直接的役割、病理的意義を明らかするために、ヒトアポAII遺伝子は本来アポAIIを有していないウサギに導入することによって、アポAIIを発現するトランスジェニック(Tg)ウサギの作製を目的とした。本年度では肝臓で特異的に発現するアポEプロモーターを有する発現ベクターとヒトアポAII c DNAとを構築した。それを用いて、876個のウサギ受精卵に注入し、28羽の仮親ウサギに移植した。得られた59羽の仔ウサギのうち、4羽がポジであった。ウサギの血清をSDS-PAGEで分析したところ、2羽のウサギはヒトアポAII蛋白を発現していることが確認された。さらに、ELISA法にて血清のアポAIIの濃度を測定した。トランスジェニックウサギのアポAIIの濃度は〜5mg/dlでヒトより低いことがわかりました。また、超遠心法によりヒトアポAIIはウサギのHDLに存在していることも確認されています。現在これらのTgウサギを用いて、コレステロール食投与実験によりアポAIIの動脈硬化の発生・進展における役割を検討している。今後、アポAII発現レベルの高いFounderウサギの作製を計画している。