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マラリア重症化に係わる新規病原因子の探求

探索与疟疾严重程度相关的新致病因素

基本信息

批准号：
16790242
负责人：
畑生俊光
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究年度は、膜結合型ケモカインの一つフラクタルカイン(FKN)に対して熱帯熱マラリア原虫感染赤血球が接着する際に利用する、新規熱帯熱マラリア原虫感染赤血球表面発現蛋白質の同定を試みた。研究方法は、(1)FKN接着熱帯熱マラリア原虫株を確立し、当該原虫株よりcDNAライブラリーを作製し、浮遊細胞株Jurkat株へ遺伝子導入する。その後、作製したcDNA導入細胞株と培養プレート表面にコーティングした組み換えFKN蛋白質(rFKN)との直接接着を観察することで、目的蛋白質をクローニングする。(2)yeast two-hybrid(Y2H)法を利用した蛋白質スクリーニングを行う、の2通りで行った。(1)について、FKN接着株を確立した後、当該原虫株よりcDNAライブラリーを作製した。作製したcDNAライブラリーを2種類の哺乳動物細胞発現ベクターに組み込んだマラリア原虫cDNAライブラリー強制発現ベクターを確立した。これらベクターをFKN受容体の発現がないことを確認した浮遊細胞株Jurkatにリポフェクション法およびエレクトロポレーション法にて遺伝子導入した。当該発現ベクターにはC末端側にGFP遺伝子を組み込んでおり、導入遺伝子産物はGFPとの融合蛋白質として発現される。そこで、導入遺伝子産物の発現はFACScanにて確認した。薬剤選抜後、rFKNとの接着を確認したが、当該細胞株とrFKNとの接着は確認できなかった。現在もスクリーニング継続中である。(2)について、Y2Hにてマラリア原虫cDNAライブラリー産物およびFKNとの相互作用を検討した結果、5個の候補蛋白質が同定された。これらの内、2個の蛋白質は接着関連蛋白質のホモローグであり、3個は未知の蛋白質であることがデータベースとの照合の結果明らかとなった。

In this study, we tried to identify proteins on the surface of red blood cells infected with FKN (membrane-bound KN) by using FKN (new regulation). The research methods are as follows: (1)FKN strain was established after heat treatment, and the cDNA of this strain was produced, and the plasmid of Jurkat strain was introduced. After the introduction of cDNA into the cell line, the expression of FKN protein (rFKN) was detected directly. (2)Yeast two-hybrid(Y2H) method is used to detect protein and protein. (1)When FKN is established, it is controlled by cDNA translation. Two species of mammalian cells were found to be able to produce cDNA fragments under stress. The expression of FKN receptor was confirmed by the method of vector introduction in Jurkat cell line. When the GFP fusion protein was expressed on the C-terminal side of the gene, the GFP fusion protein was expressed on the C-terminal side of the gene. FACScan confirms the presence of the introduced gene product. After selection, rFKN is identified when the cell strain is identified. Now you're in the middle of something. (2)5 candidate proteins were identified as a result of the interaction between Y2H and FKN. The two proteins are related to the protein, and the three proteins are unknown.