C型肝炎ウイルス蛋白質NS5BによるIRF3活性化機構の解析

丙型肝炎病毒蛋白NS5B激活IRF3机制分析

• 批准号: 16790273
• 负责人: 仲 一仁
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kanazawa University (2005)Okayama University (2004)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790273/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; NS5B; RNA依存RNAポリメラーゼ; IFN-β; TLR3; IRF-3; 細胞周期; DNA修復

C型肝炎ウイルス(HCV)の持続感染におけるTLR3シグナル経路の活性化機構,及び慢性肝炎発症から肝細胞癌発症に至るメカニズムは明らかではない.そこで.ヒト非癌不死化肝細胞株を用いてHCV蛋白質の細胞周期進行に及ぼす影響を解析した.ヒト非癌不死化肝細胞株PH5CH8,並びにNKNT-3細胞を用いてHCV構造蛋白質コアと非構造蛋白質NS3,NS4A,NS4B,NS5A,及びNS5Bの発現系を構築して細胞周期の進行を解析した結果,NS5B発現細胞においてS期の進行が遅延していることが明らかになった.このS期進行阻害はNS5B発現細胞におけるIFN-βの発現誘導に起因していた.IFN-βの誘導やS期の進行阻害は,NS5B発現細胞にTLR3に対するsiRNAを処理してTLR3の発現を抑制すると解消されることから,TLR3依存的にIRF-3シグナル経路を活性化され,IFN-βの産生が誘導されたと考えられる.ゲノムDNAの損傷時におけるDNA修復は遺伝情報を正確に伝達する上で極めて重要であり,その異常は発がんの原因になると考えられている.そこでNS5B発現による細胞周期の進行阻害がDNA修復異常を引き起こす可能性を検証した.NS5B発現細胞をDNAアルキル化剤(MMS),過酸化水素,DNA一本鎖切断を引き起こすUV-B,DNA二本鎖切断を引き起こすAdriamycinやNeocarzinostatinで処理し,その後のDNA修復能をコロニー形成を解析した結果,DNA二本鎖切断を引き起こす処理をした場合NS5B発現細胞のコロニー形成数が著しく減少することが明らかになった.以上の結果,NS5B発現細胞において細胞周期のS期の進行が遅延してDNA損傷に対する感受性が増強することが明らかとなり,NS5B蛋白質が肝発がんに関与する可能性が示唆された.

TLR3信号通路在持续感染丙型肝炎病毒（HCV）中激活的机制以及慢性肝炎发育的机制尚不清楚肝细胞癌。因此，使用人非癌症的肝细胞细胞系分析了HCV蛋白对细胞周期进程的影响。使用人非癌症的肝细胞细胞系PH5CH8和NKNT-3细胞的表达HCV结构蛋白核和非结构蛋白NS3，NS4A，NS4B，NS5A和NS5B的表达。构建了系统并分析了细胞周期的进程，并发现在表达NS5B的细胞中延迟了S期进展。 S期进展的这种抑制归因于表达NS5B的细胞中IFN-β表达的诱导。当表达NS5B的细胞对TLR3治疗siRNA时，诱导IFN-β和抑制S期进展，以抑制TLR3的表达，因此IRF-3信号途径以TLR3依赖性方式激活，并且认为NS5B表达细胞的产生。基因组DNA损伤期间的DNA修复对于准确传输遗传信息非常重要，并且异常被认为是癌变的原因。我们研究了NS5B表达对细胞周期进程的抑制可能会导致DNA修复异常的可能性。表达细胞的NS5b经历DNA烷基化剂（MMS），过氧化氢，UV-B，导致DNA单链断裂，并导致DNA双链断裂。用霉菌蛋白或新可甲硅酸盐毒素治疗后，分析了随后的DNA修复能力以形成菌落，并揭示了用DNA双链断裂处理后，表达NS5B的细胞中表达NS5B的细胞的菌落数量显着降低。以上结果表明，在表达NS5B的细胞中，细胞周期的S期的进展延迟，增加了对DNA损伤的敏感性，这表明NS5B蛋白可能参与肝癌作用。

项目成果

Hepatitis C virus NS5B delays cell cycle progression by inducing IFN-β via Toll-like receptor 3 signaling pathway without replicating viral genomes

丙型肝炎病毒 NS5B 通过 Toll 样受体 3 信号通路诱导 IFN-β 延迟细胞周期进程，而不复制病毒基因组

• 发表时间: 2006
• 期刊: Virology (印刷中)
• 作者: Naka;K.;Dansako;H.;Kobayashi N.;Ikdeda M.;Kato N.
• 通讯作者: Kato N.