ヒト血中アポE含有HDLの定量分析法の確立と臨床応用

人血液中含apoE HDL定量分析方法的建立及临床应用

• 批准号: 16790314
• 负责人: 臼井 真一
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790314/
• 关键词: HDL; アポリポプロテインE; 動脈硬化; 危険因子

アポE含有HDL定量分析法の確立とその臨床的意義を検討するために、今年度も研究計画に沿って昨年度に引き続き「血中アポE含有HDLの定量分析法の確立」を中心に研究を進めた。サンドイッチELISA法による選択的測定法の検討では、捕捉抗体に抗アポリポタンパク質A-I抗体(抗アポA-I抗体)、検出抗体にビオチン標識抗アポE抗体を用いた場合、VLDLやIDLなどHDL以外のアポE含有リポタンパク質が非特異的にプレートに結合することが最大の問題点であった。これを解決するために洗浄液の組成やブロッキング液の種類・組み合わせを広げて検討した結果、洗浄液組成に非イオン性界面活性剤であるプルロニックF68を加えることで改善されたが、十分なS/N比を得ることは困難であった。検出感度を上げる目的で蛍光色素(Amplex Red)の導入も試みたが改善は認められなかった。検出シグナルが小さいことの原因としては、超遠心やヘパリンアフィニティクロマトグラフィで粗精製したアポE含有リポタンパク質はウエスタンブロッティグ法で判断する限り予想以上にアポA-I含量が少なく、抗アポA-I抗体ではアポE含有HDLを十分に捕捉できていない可能性が考えられた。また、アポE含有HDLはアポE非含有HDLと競合して抗アポA-I抗体に結合することも一要因であった。捕捉抗体に抗アポE抗体、検出抗体に抗アポA-I抗体を使う系においても、アポE含有HDLと他のアポE含有リポタンパク質(VLDLなど)が競合して抗アポE抗体に結合するため、VLDL濃度が高いサンプルでは影響を大きく受けた。さらに、捕捉抗体および検出抗体の両方に抗アポE抗体を使用し、サンプル反応液中に非イオン性界面活性剤などを共存させることで選択的にアポE含有HDLのみを捕捉する系についても検討を行ったが、非特異的なプレートへの結合が再度問題となった。

The establishment of a quantitative HDL analysis method for HDL in E-E and its clinical significance are based on this year's research plan. "Establishment of a quantitative analysis method for HDL content in blood" was carried out last year at the Center for Research. ELISA method of サンドイッチELISA method によるSelected measurement method の検では、capture antibody にantiアA-リポタンパク antibody (anti-アポA-I antibody), Kakude antibody A-パク logo When anti-AnaE antibodies are used, VLDL, IDL and AnaE containing other than HDL The biggest problem with the non-specific にプレートに combined with the することがであった.これをsolved するためにThe composition of the cleaning liquid やブロッキング Liquid type・combination わせを広げて検したThe result, the composition of the cleaning liquid に不イオThe neutral interface activity of F68 is improved and the S/N ratio is very difficult. Sensitivity is improved by introducing the photopigment (Amplex Red) and improving the sensitivity.検出シグナルが小さいことのcause としては, 超心やヘパリンアフィニティクロマトグラフィでrough and refined したアポE contains リポタンパクquality はウエスタンブロThe ッティグ method is used to determine the limit of the するA-I content and the resistance to にアポA-I. The I antibody contains HDL and has a very high possibility of capturing it. The primary reason for the combination of anti-Ana A-I antibodies and the binding of anti-Ana A-I antibodies is that they contain HDL and do not contain HDL. Capture antibody, anti-AnaE antibody, Takude antibody, anti-AnaA-I antibody, AnaE antibody, AnaE containing HDL, Taide antibody, anti-AnaA-I antibody, AnaE containing HDL, etc. The anti-Ana E antibody is bound to VLDL and the VLDL concentration is high and the VLDL concentration is affected by it.さらに、Capture antibody および検出账速度の両方にAnti-AnoE antibody をUse し、サンプルreaction solution にnon-イオンsexual interface active などを coexist させることで选択's にアポE contains HDL's のみをcapture system についても検 Discussionを行ったが, non-specific なプレートへのcombination, again problem となった.