肺高血圧症に対する新しい治療法の開発:血管再生療法による試み

肺动脉高压新疗法的开发：血管再生疗法的试验

• 批准号: 16790600
• 负责人: 菅原 洋子
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790600/
• 关键词: 肺高血圧; 骨髄由来単核球細胞

7週齢の雄性Lewisラットにモノクロタリン(MCT)60mg/kgを皮下投与し、肺高血圧(PH)モデルを作成。またラットの大腿骨より骨髄を採取、単核球を分離し、2×10^7/6cm dishで間葉系幹細胞増殖培地(MF-Medium)を用い培養。60〜80%コンフルエントで継代した。モノクロタリン投与後、2週間経過したラットの外頚静脈よりMillarマイクロチップカテーテルを挿入し、大動脈圧、右室圧を測定した。PHモデル全例で右室圧が上昇しているのを確認。確認後、PKH2-GLで蛍光標識した培養細胞を肺動脈内に投与した。投与後,1日後,2週間後に犠牲死させ,移植細胞の動態をRIにて評価した。細胞投与1日後、2週間後ともに、肺内に生理食塩水を投与したコントロール群に比し、PHモデルでは、有意に標識培養細胞が肺組織内に分布していることがRI検査で確認出来た。また、半減期で補正して、標識培養細胞の経時的変化をみた。RI検査にて、PHモデルでは、コントロール群に比べ、標識培養細胞が2週間後でも肺内により多く残存している傾向がみられた。また、培養細胞投与2週間後に、再度カテーテル検査を行い、右室圧の評価を行った。PHモデルでは、培養細胞投与前およびコントロール群に比し、投与後右室圧の減少を示した。肺動脈の血管造影では、投与前に比べ、肺血管が増強している傾向がみられた。カテーテル終了後、PHモデルを犠牲死させ、心臓および肺組織を摘出し、現在、肺病理像およびVEGF蛋白発現の検討を行っている。

Male Lewis rats at 7 weeks old were treated subcutaneously with 60mg/kg of MCT and pulmonary hypertension (PH). The stem cells were cultured in MF-Medium at a 2×10^7/6cm dish. 60 ~ 80% of the time. The arterial pressure and right ventricular pressure were measured at 2 weeks after administration. The right ventricular pressure in all cases was increased and confirmed. After confirmation, PKH2-GL was identified and cultured in the lung. After 1 day and 2 weeks, the transplanted cells were sacrificed, and the dynamic RI of the transplanted cells was evaluated. 1 day after cell administration, 2 weeks after cell administration, the distribution of cultured cells in lung tissue was confirmed by RI test. The half-time correction and identification of the changes in the culture of cells RI test, PH test, PCR test. After 2 weeks of culture, the right ventricular pressure was evaluated again. The decrease of right ventricular pressure was observed after the administration of PH to cultured cells. Pulmonary artery angiography is more intense than before, and pulmonary vessels are more intense. After the death of the disease, PH, lung tissue, lung pathology and VEGF protein expression were studied.