チラコイド膜局在性イミュノフィリンおよび相互作用するタンパク質の生理機能の解明

阐明类囊体膜定位亲免蛋白和相互作用蛋白的生理功能

• 批准号: 05F05449
• 负责人: 久堀 徹
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05F05449/
• 关键词: イミュノフィリン; 葉緑体; TAPタグ; 蛋白質間相互作用

本研究では、葉緑体チラコイド膜ルーメンに存在するイミュノフィリンの生化学的な性質および生理学的な重要性を明らかにすることを目指している。特に、イミュノフィリン蛋白質が相互作用する相手の同定を研究目的の一つにおいており、本年度は、下記のような研究を実施した。(1)葉緑体に局在するイミュノフィリンのうち、12種類のFKBPについて発現系を構築した。(2)これらのプラスミドで大腸菌を形質転換し、可溶性の蛋白質を得て、10種類については、特異抗体の作成ができた。(3)新たに作成した抗体を用いて、野生型および変異イミュノフィリンで形質転換したシロイヌナズナについてチラコイド膜タンパク質の分析を行った。その結果、FKBP16-1がLHCIIと共局在すること、16-2,19がPSIと共局在すること、16-4,18がPSIIと共局在することを明らかにした。(4)タンデムアフィニティー精製用タグをもった5種類の葉緑体イミュノフィリンの発現系を構築し、シロイヌナズナの形質転換を行ったが、結果はまだ得られていない。

这项研究旨在阐明叶绿体囊体膜腔中存在的免疫蛋白的生化特性和生理重要性。特别是，研究目的之一是确定免疫蛋白相互作用的伴侣，今年我们进行了以下研究。 （1）在局部叶绿体的免疫蛋白中为12种类型的FKBP构建了表达系统。 （2）用这些质粒转化大肠杆菌以获得可溶性蛋白，并为10种类型的特异性抗体产生特异性抗体。 （3）使用新创建的抗体用野生型和突变体免疫蛋白转化的拟南芥上分析类囊体膜蛋白。结果表明，FKBP16-1与LHCII共定位，16-2,19与PSI共定位，而16-4,18与PSII共定位。 （4）构建了五种具有串联亲和力纯化标签的叶绿体免疫蛋白的表达系统并转化了拟南芥，但尚未获得结果。