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ブタ遺伝資源の保全のための体外胚生産システムの確立

建立猪遗传资源体外胚胎生产体系

基本信息

批准号：
05F05648
负责人：
菊地和弘
金额：
$ 0.96万
依托单位：
National Institute of Agrobiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05F05648/
关键词：
ブタ体外受精凍結保存染色体解析単為発生サイトカラシンB

项目摘要

本研究では、1)多精子受精卵の発生能の解析と、多精子受精を回避する顕微授精法の確立、2)体外生産胚ならびに顕微授精胚のための培養システムの改良、および3)体外生産胚ならびに顕微授精胚の凍結保存技術の改良を行う計画をたてた。1)と3)については以下の結果を得た。なお、2)については現在実験を継続している段階にある。1)ブタ体外受精では、多精子侵入による受精の成立が胚における倍数性の異常を引き起こす最大の要因となっている。本細部課題では、ブタ卵子が多精子受精を排除・許容する生理学的機構の解明、ならびにそれらが初期胚にまで発生する機構について研究を実行している。多精子侵入のほか、未成熟卵への精子侵入による受精の成立も胚の倍数性異常を引き起こす一要因である。この場合、受精が成立すると初期発生も進行するが、胚盤胞への発生率が低く品質も劣ることを見いだした。なお、染色体解析の結果、倍数性に異常が認められた(Somfai et al.,2005)。3)体外成熟卵の凍結保存法として、ガラス化冷却(超急速凍結)を行った。Solid Surface Vitrification (SSV)法を用いて冷却を行い、加温後、単為発生刺激を加え体外培養を行った結果、胚盤胞まで発育させることができた(Somfai et al.,2006)。また、本細胞課題では、細胞骨格安定剤による前処理法の確立を目指すが、その前段階として、細胞骨格安定剤の1つであるサイトカラシンBが、卵子の成熟・受精・発生にどのように影響を及ぼすかの確認を行った。その結果、第一極体の放出を押さえ二倍体化を引き起こし、活性化刺激を与えると単為発生が誘起され胚盤胞にまで発生することを明らかにした。したがって、受精後は倍数性異常を起こす可能性が示唆される。本研究成果は現在、Reproductionに投稿中である。

The main results of this study are as follows: 1) the analysis of the energy of multi-sperm fertilized eggs, the avoidance of multi-sperm fertilization, the establishment of micro-insemination method, 2) in vitro embryo development, micro-fertilization embryo culture, and so on. 3) in vitro embryo development, embryo development, micro-fertilization embryo preservation, and so on. 1) 3) check the results below. Please do not know what to do now. Please do not know what to do. The main results are as follows: 1) in vitro fertilization and multiple sperm intrusive fertilization, the establishment of embryogenesis, ploidy, polyploidy, ploidy, ploidy, polyploidy, polyploidy. In this department, polysperm fertilization in oocytes is excluded from the understanding of the physiology of the ovum, and the research is conducted by the embryo health mechanism in the early stage of the pregnancy. Multiple spermatozoa invade oocytes, immature eggs invade spermatozoa and fertilize to establish embryo ploidy. At the initial stage of the establishment of fertilization and fertilization, the pregnancy was carried out in the early stage of pregnancy, the birth rate of embryo cells was low, the birth rate was low, and the quality was poor. The results of chromosome analysis, chromosome analysis and polyploidy were detected by PCR, Somfai et al.,2005. 3) the oocytes matured in vitro were cured by the method of preservation and cooling (ultra-rapid cooling). The Solid Surface Vitrification (SSV) method was used to cool the mouse, after heating, to stimulate the growth and culture in vitro to carry out the results of the experiment, and the embryo cell culture was used to reproduce the culture medium (Somfai et al.,2006). The target, the cell, the egg, the egg, the mature, fertilized, fertilized and fertilized. According to the results of the experiment, the diploidization was induced by the release of the first mouse, and the activation stimulation and activation were induced to induce the growth of the embryo. After fertilization, polyploidy often occurs and the possibility indicates instigation. The results of this study are currently being submitted by Reproduction.