权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

鎮痛オピオイド受容体のアフィニティラベリングによる活性化分子起動メカニズムの解明

通过亲和标记镇痛阿片受体阐明激活分子激活机制

基本信息

批准号：
05J06214
负责人：
磯崎要
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、鎮痛作用に関わるオピオイド受容体のペプチドリガンドに付加したNpys基と受容体のCys残基間でのチオールジスルフィド交換反応により、オピオイド受容体をアフィニティラベリングすることで受容体-リガンド複合体を作製し、構造活性相関を解析するものである。本年度は、δオピオイド受容体に13個存在する全てのCys残基をAla残基に変異させ、かつGタンパク質もしくは蛍光タンパク質であるGFPを融合させたコンストラクトを作製した。それらの発現解析およびリガンド結合性と受容体活性化能を評価した。さらに、ラベルされた受容体タンパク質の生物活性も評価した。その結果、Cys273およびCys303のAla置換において著しいラベル能の低下がみられた。一方、第2細胞内ループに存在するCys151をAla置換すると、全くラベリングが起らなくなった。これらの結果をさらに検証するために、リガンドのN末端アミノ基の結合部位の同定を試みたところ、Asp128であることが判明した。そこで3次元構造をもとにアフィニティリガンドと受容体との相互作用について推察したところ、Cys151はリガンド結合部位から遠く離れていることから、Cys273およびCys303がラベルされるCysであることが同定された。また、Cys151を変異させると細胞膜上への発現が阻害され、リガンド結合性には影響がないが、受容体活性化能が著しく低下することが示された。アフィニティラベリングの結果と併せて考察すると、通常GPCRではC末端でパルミトイル化が起るが、δオピオイド受容体ではCys151が第2のパルミトイル化サイトとして構造および機能を制御している可能性が示唆された。本研究では、δオピオイド受容体のCys残基に関する系統的な解析を実施し、構造と活性との相関関係を分子レベルで検討し、受容体起動の構造要因の一端を明らかにすることができた。

This study is concerned with the synthesis of receptor-receptor complexes and the analysis of structure-activity correlations between receptor-receptor interaction and receptor-receptor interaction. This year, there were 13 fusion sites in the receptor, including all Cys residues, Ala residues, and GFP residues. The analysis and evaluation of the binding and receptor activation properties of the compounds In addition, the biological activity of the receptor is evaluated. As a result, Cys273 and Cys303 were replaced by Ala. Cys151 is present in the first and second cells. The results showed that the binding sites of the N-terminal amino acids were identical to those of Asp128. The three-dimensional structure of Cys273 and Cys303 is composed of three parts: Cys273 and Cys303. Cys151 changes in cell membrane inhibition, inhibition of binding, inhibition of receptor activation The results of GPCR analysis show that the possibility of controlling the structure and function of the C-terminal GPCR receptor Cys151 is usually discussed. In this study, we analyzed the molecular structure of the system related to the Cys residues of the receptor and discussed the structural factors of receptor activation.

项目成果

期刊论文数量（21）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Isobutyryl-RYYRIK-NH_2, A Highly Potent Nociceptin Antagonist.

Isobutyryl-RYYRIK-NH_2，一种高效的伤害感受肽拮抗剂。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Peptide Science 2004
影响因子：
0
作者：
K. Matsumoto;et. al.;S.Kanchiku et al.;Atsushi Kaneki et al.;K.Matsumoto et al.;Yuko Tsuda et al.;Y.Sawada et al.;T.Yamaguchi et al.;Y.Sawada et al.;Kaname Isozaki et al.;K.Matsumoto et al.;Kaname Isozaki et al.
通讯作者：
Kaname Isozaki et al.

ペプチド合成とその評価

肽合成及其评价

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
K. Matsumoto;et. al.;磯崎要
通讯作者：
磯崎要

Oprimization of the N-Terminal Group of Ac-RYYRIK-NH_2 as ORL1 Receptor Antagonist

Ac-RYYRIK-NH_2 N 端基团 Oprimization 作为 ORL1 受体拮抗剂

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
Peptide Science 2007
影响因子：
0
作者：
Jinglan Li;et. al.
通讯作者：
et. al.

Residual Roles of Hydrophobic Amino Acids in the Fifth Transmembrane Domain of ORL1 Receptor in Its Activation.

ORL1 受体第五跨膜结构域中疏水性氨基酸在其激活中的残留作用。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Peptide Science 2006
影响因子：
0
作者：
Y. Sawada;et. al.;T. Yamaguchi;Kaname Isozaki et al.
通讯作者：
Kaname Isozaki et al.

Synthesis and Receptor-Binding Activity of Morphiceptin Analogs Containing α,α-Disubstituted Glycine in the Position 2.

2 位含有 α,α-二取代甘氨酸的 Morphiceptin 类似物的合成和受体结合活性。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Peptide Science 2004
影响因子：
0
作者：
K. Matsumoto;et. al.;S.Kanchiku et al.;Atsushi Kaneki et al.;K.Matsumoto et al.;Yuko Tsuda et al.;Y.Sawada et al.;T.Yamaguchi et al.;Y.Sawada et al.;Kaname Isozaki et al.;K.Matsumoto et al.;Kaname Isozaki et al.;松本和弘;K.Matsumoto et al.;松本和弘・山口哲史・香月勗;Takashi Yamada et al.
通讯作者：
Takashi Yamada et al.