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リソソーム性薬物トランスポーター欠損マウスによる薬物耐性獲得の分子制御機構

溶酶体药物转运蛋白缺陷小鼠获得耐药性的分子调控机制

基本信息

批准号：
05J06267
负责人：
廣田有子
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでLAPTM4αは細胞質側カルボキシル基末端に4つのtyrosine-based motif(YxxΦ)をもち、その中の2番目、3番目のmotifがLAPTM4αのリソソームへのターゲッティングに必要であるということが報告されていた。本研究により、LAPTM4αはカルボキシル基末端に一部tyrosine-based motifと重複した3カ所のPY motifをもつことを新たに見出した。PY motifはユビキチンリガーゼの一種であるNedd4のWW domainと結合することが知られている。そこで本年度はLAPTM4αのこれら3カ所のPYmotifとユビキチン化及び、後期エンドソーム・リソソームへの局在化への関与について、GFP融合LAPTM4αをCOS細胞に発現させ検討を行った。その結果、いずれのPY motifに変異を導入した場合においても、LAPTM4αはトランスフェクション時間に応じて後期エンドソーム・リソソームへの移行を示した。しかしながら、3つのPY motif全てに変異を導入した場合、全年度に報告したような多胞体様小胞内部への染色は観察されず限界膜に局在していた。さらに免疫沈降の実験により、LAPTM4αはNedd4と相互作用することが明らかになった。興味深いことに、3つのPY motif全てに変異を導入させたところ、Nedd4との結合が著しく減弱した。これらの結果から、LAPTM4αとNedd4の相互作用が多胞体様小胞内部への陥入に関与する可能性を示唆することが出来た。

The LAPTM4α cytoplasmic side chain contains 4 sets of tyrosine-based motif(YxxΦ), and the 2 sets of motif and 3 sets of motif in the LAPTM4α chain are reported. In this study, LAPTM4α was found to be a tyrosine-based motif at the end of the base. PY motif is a combination of Nedd4 and WW domains. This year, the PYmotif of LAPTM4 α and the development of LAPTM4 α in COS cells were discussed. The results show that the PY motif is different from the original, and the LAPTM4α is different from the original. In addition, the annual report on the internal staining of polysomes and the internal limiting membrane of polysomes is also available. The interaction between LAPTM4 α and Nedd4 α is very important. The three motions are all different, and the four motions are all different. The interaction between LAPTM4 α and Nedd4 indicates the possibility of intercellular interaction.