权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

トランスゴルジネットワーク上で制御される新規なエンドソーム形成機構の解明

阐明跨高尔基体网络调节的新型内体形成机制

基本信息

批准号：
21K06157
负责人：
長野真
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、(1) Rab5特異的なGFEFであるVps9pの結合因子の探索、(2) Pik1p/Rab11/GGAsによるRab5活性化のメカニズム、および(3) Arf1pと独立してRab5の活性化を制御する因子の探索を進めた。(1)では、GST-Vps9pをbaitとして、出芽酵母のタンパク質抽出液からVps9p結合因子の単離を試みた。まず、大腸菌リコンビナントでGST-Vps9pを発現・精製する実験系を導入し、完了した。続いて、得られたGST-Vps9p用いて、プルダウン法で結合タンパク質の精製を行った。現在のところ、コントロールとしておいたGSTのプルダウンフラクションと比較して、SDS-PAGE上、GST-Vps9pで特異的なバンドは得られていない。次年度は、精製法の改善を図る。(2)では、3つの因子について、単独あるいは複数組み合わせで、機能欠損株を作製し、Rab5ホモログVps21pの活性化レベルを解析した。この結果、Pik1p単独の機能欠損株では、野生株と比較して80%以上の活性化レベルであり、単独では大きな影響を与えないことを明らかとした。次に。複数組み合わせて機能欠損株を解析したところ、Pik1/Rab11の機能欠損株で60%程度、Pik1/Rab11/GGAsの機能欠損株で10%まで低下することを見出した。これら以外の組み合わせでも同様に検討し、Pik1、Rab11、GGAsがそれぞれ独立してRab5活性化に関与することが明らかとなった。これらの研究結果を含め、学術論文に投稿し、現在査読中である。(3)では、ゴルジ/TGNに局在するタンパク質の中で、その遺伝子欠損によって、エンドソーム輸送前後のステップでエンドーリソソーム輸送が異常となるものに注目し、ARF1との二重欠損株を作製し、GFP-Vps21pのエンドソーム輸送への影響を解析した。

This year's Rab5, (1) the exploration of the combination factor of the GFEF characteristic Vps9p, (2) the Pik1p/Rab11/GGAs activity of the Rab5, and (3) the progress of the Arf1p independent activation of the Rab5. (1) Vps9p binding factor isolation test was carried out in the extract of yeast sprouting yeast, GST-Vps9p bait and budding yeast. In the first place, you can find that the GST-Vps9p is very good. You have to pay for it. This is done by using the method of GST-Vps9p and the method of combining with the method of information processing. Now there is a lot of information on the GST-Vps9p, SDS-PAGE, GST-Vps9p, and so on. There is a lot of information on the Internet. In the next year, the fine law will improve the quality of the market. (2) Rab5, 3-factor, single-factor, multi-factor, single-factor, single-factor, multi-factor, single-factor The results showed that the results showed that the Pik1p mono-machine could reduce the number of strains, the activity of wild plants was 80% higher than that of wild plants, and the sensitivity of wild plants was higher than that of wild plants. Ji Ji. The number of replicas can be used to analyze the number of strains, the degree to which the Pik1/Rab11 machine can owe the strain is 60%, and that of the Pik1/Rab11/GGAs machine is 10% lower than that of the strain. This is the same as that of Pik1, Rab11, GGAs, and so on. The Rab5 activation protocol is independent of each other. The results of the study are detailed, and the academic papers have been submitted, and they are now being reviewed. (3) in the first place, the TGN bureau said that there was a bad situation in the market, and that there was a bad situation in the market, and that the message was sent back and forth in front and back, so as to make sure that it was frequently noticed, that the ARF1 had a double deficit, and that the GFP-Vps21p had a negative effect on the analysis.