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ラット脳幹孤束核における神経伝達物質放出制御機構の解明

阐明控制大鼠脑干孤核神经递质释放的机制

基本信息

批准号：
05J06865
负责人：
繁冨英治 (2006)
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、昨年度確立したin-vivo神経節遺伝子ノックダウンによるシナプス伝達の影響を解析した。スライス標本を用いた伝達物質放出の定量的解析アデノシンA_1受容体のmRNAに対する合成siRNA(siRNA^<A1R>)の節状神経節導入1-15日後、節状神経節を摘出し、RNAを抽出し、定量RT-PCR法によりmRNA発現量を定量した。A_1受容体のmRNAの対GAPDH発現率は導入3-7日で30%以下まで低下した。シナプス伝達に及ぼすA_1受容体遺伝子ノックダウンの影響を評価するため、節状神経節を摘出した個体から脳幹スライス標本を作成し、脳スライス標本を用いて、1次求心線維刺激誘発興奮性シナプス後電流(eEPSC)の振幅に及ぼすアデノシン(100μM)の影響を検討した。siRNA導入10日後までは、アデノシンは、無処置群と同程度(抑制率、41.1±7.3%)かつ同様の時間経過でeEPSC振幅を抑制した。導入11日後、この抑制率は16.3±3.4%まで有意に減弱した。アデノシンのeEPSC振幅抑制効果のsiRNAによる減弱は導入後13日まで持続した。どの遺伝子も標的としないように配列されたランダムsiRNA(siRNA^<RND>)およびvehicleとして用いたPBSの導入はアデノシンによるeEPSC振幅抑制に影響しなかった。誘発EPSCの各パラメータ(振幅、rise time、decay tau)には、siRNA^<A1R>導入群、siRNA^<RND>導入群、PBS導入群および無処置群(日齢一致)の間に有意な差はなかった。以上の実験成果から、脳に投射する神経細胞にRNAiを用いた遺伝子ノックダウン法を適用することにより、脳幹孤束核シナプスにおける特定の遺伝子の機能的ノックダウンが可能であることが実証された。以上の成果をまとめ、近日中に神経科学専門誌に投稿する予定である。

This year た, last year established たたin-vivo Shinto shoji legacy 伝 descendants ノッダウダウによるシナプス伝によるシナプス伝 reach を influence を analysis たた. をスライス specimen with いた伝 of material の quantitative analytical アデノシン A_1 by let body の mRNA にす seaborne る synthetic siRNA (siRNA ^ < A1R >) の section shape god 経 import section 1-15 later section, section shape god 経を extraction pump, RNA をしし, quantitative rt-pcr method により mRNA 発 now quantity を quantitative した. The occurrence rate of GAPDH by A_1 acceptor <s:1> mRNA <e:1> after 3 to 7 days of introduction で below 30% まで low <s:1> た. シナプス伝 da に and ぼす A_1 by let body heritage 伝 son ノックダウンのを appraisal of 価するため section, section shape god 経を pick out した individual から脳 dry スライス specimen をし, consummate 脳スライをス specimen with いて, heart line 1 d stimulation induced 発 excitatory シナプス (eEPSC) after the current amplitude にの and ぼすアデノシン (100 microns Youdaoplaceholder0 affects た. SiRNA import 10 days までは, アデノシンは, no 処 group と (inhibition rate, 41.1 + / - 7.3%), the same extent かつ with others の time 経で eEPSC amplitude を inhibit した. After 11 days of introduction, the <s:1> inhibition rate まで was 16.3±3.4% and まで intentionally に weakened by たた. The amplitude inhibition effect of アデノシ <e:1> <s:1> eEPSC was weakened by <s:1> siRNAによる 13 days after <s:1> introduction まで maintained 続 <s:1> たたた. どの posthumous son 伝も mark としないように match column されたランダム siRNA (siRNA ^ < RND >) および vehicle として in いた PBS の import はアデノシンによる eEPSC amplitude に effect しなかった. Induced 発 EPSC の each パラメータ (amplitude, rise time and decay tau) には, siRNA ^ < A1R > import groups, siRNA ^ < RND > import group and PBS group import および no 処 buy group (齢 consistent) のに intentionally な difference between はなかった. Above の be 験 results から, 脳に projection する god 経 cells に RNAi を with いた posthumous son 伝ノックダウンを applicable することにより, dry 脳 solitary nucleus シナプスにおける specific の heritage 伝 son の function ノックダウンが may であることが card be された. The above <s:1> achievement をまとめ was recently submitted to the に journal of the Department of Theology and Economics に for approval at する.