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Consfrudaon of sensitive environment monitoring devices using a noncompetitive immunodetection system

非竞争性免疫检测系统敏感环境监测装置的构建

基本信息

批准号：
17360394
负责人：
UEDA Hiroshi
金额：
$ 8.17万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17360394/
关键词：
phage display immunoassay antibody variable region open sandwich mycotoxin ELISA peptide trans splicing アルカリフォスファターゼサンドイッチ法免役測定スプライシング Phage display Immunoassay Variable region alkaline phosphatase luciferase open sand

项目摘要

The objective of this study was to make a comprehensive and sensitive detection system of low molecular weight analytes through the use of a novel immunoassay principle that utilizes the stabilization of antibody Fv region upon binding with antigen (open sandwich immunoassay, OS-IA). To this end, we cloned the Fv genes of the antibodies for two anti-neonicotinoid pesticides, a mycotoxin, and a low molecular weight peptide BGP-C7, and succeeded in the construction of OS-IA system and sensitive noncompetitive detection thereof. Especially in the last system, rapid detection from a minute amount of serum sample was attained by a microchip-based detection system.Through this process, we realized the importance of optimized phage display format for the selection of antibodies that are suitable to OS-IA. In addition to split Fv system already developed, an scFv-OS conversion system based on ere recombinase was developed, as well as an Fab-OS conversion system which enabled construction and selection of larger library of 10^8 size. While the scheduled construction of cell-free selection system is yet to be done, we think efficient selection of larger and focused library for OS-IA is soon to be realized, which will enable sensitive detection of various small analytes such as environmental pollutants and protein modification such as phosphorylation and truncation.As an unplanned result, we developed a novel method to express antibody fusion proteins in antibody producing cells through ''trans'' splicing of the pre-mRNAs in the cell nucleus. As a model system, a VH-enzyme fusion mRNA and corresponding protein that is indispensable in OS-IA were successfully expressed in COS-1 cells. Elucidation of rapid fabrication methods of such fusion proteins from established hybridoma resources without the need of gene cloning is envisaged based on this principle as well as other principles.

本研究的目的是通过使用一种新的免疫测定原理，利用抗体Fv区与抗原结合后的稳定性（开放夹心免疫测定，OS-IA），建立一个全面和灵敏的低分子量分析物的检测系统。为此，我们克隆了两种抗烟碱类农药、一种真菌毒素和一种低分子量肽BGP-C7的抗体的Fv基因，并成功地构建了OS-IA系统及其灵敏的非竞争性检测。特别是在最后一个系统中，我们利用基于微芯片的检测系统实现了对微量血清样品的快速检测，通过这个过程，我们认识到优化噬菌体展示形式对于筛选适合OS-IA的抗体的重要性。除了已经开发的分离Fv系统之外，还开发了基于ere重组酶的scFv-OS转化系统，以及能够构建和选择10^8大小的更大文库的Fab-OS转化系统。虽然无细胞选择系统的预定构建尚未完成，但我们认为OS-IA的更大和集中的文库的有效选择很快就会实现，这将使各种小分析物如环境污染物和蛋白质修饰如磷酸化和截短等的灵敏检测成为可能。我们开发了一种新的方法，通过细胞核中前mRNA的“反式”剪接在抗体产生细胞中表达抗体融合蛋白。作为模型系统，在COS-1细胞中成功表达了OS-IA中不可缺少的VH-酶融合mRNA和相应蛋白。基于这一原理以及其他原理，设想了从已建立的杂交瘤资源中快速制备这种融合蛋白而不需要基因克隆的方法的阐明。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Mimicry of erythropoietin and interleukin-6 signaling by an antibody/cytokine receptor chimera in murine myeloid 32D cells

小鼠骨髓 32D 细胞中抗体/细胞因子受体嵌合体模拟促红细胞生成素和白细胞介素 6 信号传导

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
J.Biochem 141
影响因子：
0
作者：
M.Kawahara M.;H.Ueda;K.Tsumoto;I. Kumagai;T.Nagamune
通讯作者：
T.Nagamune

マイクロ流路を用いた微量低分子診断マーカーの非競合高速度検出

使用微通道非竞争性高速检测痕量小分子诊断标记物

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Ayabe;K.;Zako;T.;Ueda;H.;H. Ueda;田辺明人・伊原正喜・上田宏;芳川天音・呉雨書・高橋寛子・馬渡和真・伊原正喜・北森武彦・上田宏
通讯作者：
芳川天音・呉雨書・高橋寛子・馬渡和真・伊原正喜・北森武彦・上田宏

転写制御因子Drlを認識する細胞内抗体の選択とその機能解析

识别转录调节因子Drl的胞内抗体的筛选及其功能分析

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
S. Waki;K;Yoshitake;R. lwasaki;and;呉雨書・高橋寛子・佐藤香枝・志村清仁・北森武彦・上田宏;小嶋美樹・黒川直也・岩崎亮平・上田宏;黒田翔・吉田将志・伊原正喜・上田宏;加藤洋平・笹島義志・伊原正喜・上田宏
通讯作者：
加藤洋平・笹島義志・伊原正喜・上田宏

Exogenous gene expression and growth regulation of hematopoietic cells via a novel human artificial chromosome.

通过新型人类人工染色体进行外源基因表达和造血细胞生长调节。