权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

自律複製する染色体外遺伝因子の細胞内動態と細胞外排出を支配する分子機構

控制自主复制染色体外遗传元件的细胞内动力学和细胞外排泄的分子机制

基本信息

批准号：
17370002
负责人：
清水典明
金额：
$ 10.5万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17370002/
关键词：
Extrachromosomal element Micronucleus Gene Amplification Double Minutes Homogeneously Staining Region Episome Mammalian Vector Replication Initiation Region Extrachromosoal element Gene amplification DNA replication Initiation Region

项目摘要

A:染色体外遺伝因子の、微小核への取り込みを介した細胞外排出HeLa H2B-GFP細胞を用いて集中的なタイムラプス実験を繰り返すことにより、染色体型微小核の形成機構、微小核を持つ細胞の挙動、および、微小核多様性の原因について新発見が多く得られた。また、我々はすでにDMを生細胞内で可視化したCOLO 320DM-GFP株を樹立していたが、本年度にはこの細胞を用いて周到なタイムラプス実験を行うことにより、間期核からDMが細胞質に移動して微小核を形成する過程、および微小核が細胞質膜のブレッブに取り込まれて細胞外に放出される過程、について明確な根拠を得ることができた。このことは細胞生物学上極めて重要な発見であるとともに、DMが細胞間で転移する可能性を示唆しており、重大な意味を持つ。(B;染色体外遺伝因子を介した遺伝子増幅の機構)HSRやDM内での組み替え点を極めて多数単離し、その塩基配列を決定していくことにより遺伝子増幅の分子機構に関する理解が深まった。一方、末端がヘアピン構造である直鎖状プラスミドDNAは、IRとMARの配列を持つことに依存して、染色体外で安定に維持されるようになることを前年度に見いだしていた。本年度には、その分子機構に関して明確なモデルを得ることができた。この実験系は、染色体外で複製開始を指示する配列を評価することができるため、極めて有益な系である。(C;遺伝子増幅を利用した蛋白質生産)IR/MARプラスミドとテロメア配列を組み合わせることにより、染色体外で増幅して安定に維持され、なおかつ蛋白質発現量が高くなる新規実験系を見いだした。この方法をテロメア化IR/MAR遺伝子増幅法と命名した。この方法は、細胞生物学上興味深いとともに、蛋白質生産にとっても有力な方法となることが期待された。

A: Chromosomal exogenic factors, micronucleus selection, extracellular efflux, and mechanisms for chromatin micronucleus formation, micronucleus maintenance, and cell motility, as well as the causes of micronucleus diversity. The COLO320 DM-GFP strain was established in the cells of DM and visualized in the cells of DM. This year, the cells of DM were used in the process of cytoplasmic migration, micronucleus formation, micronucleus membrane extraction, extracellular release, and root formation. This is an extremely important observation in cell biology. It shows the possibility of intercellular migration of DM and its significance. (B; Exo-chromosomal gene expression and gene amplification mechanism)HSR and DM have a deep understanding of the molecular mechanism of gene amplification. The structure of one side and one end of the chromosome is directly linked to the DNA, IR and MAR. The alignment of the DNA and IR is dependent on the stability of the chromosome. This year, the molecular structure of the company is clearly defined. This is the first time that an extra chromosome has been cloned. (C) Increase in protein production due to gene amplification)IR/MAR shift from chromosome to chromosome alignment, from chromosome to chromosome, from chromosome to chromosome. This method is called IR/MAR. This method is of great interest in cell biology and protein production.