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特定染色体領域に濃縮される核マトリックス構成RNAの解析

分析集中在特定染色体区域的核基质成分 RNA

基本信息

批准号：
12874100
负责人：
清水典明
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12874100/
关键词：
Gene amplification Double Minutes Micronucleus Nuclear Matrix Exjtrachromosomal DNA Chromosome territory FISH RAP extrachromosomal DNA Gene Amplification DNA replication transcription chromosome territory

项目摘要

がん細胞にみられる増幅遺伝子は、多くの場合染色体外遺伝因子であるDMの上に存在する。DMが排出されると、`多くのがん細胞は脱がん化、分化する。この際の排出は、細胞質に生じた微小核へDMが極めて選択的に取り込まれることを介する。我々は、微小核を精製する方法を樹立し、その中のDNAを調べたところ、DMのDNAが高度に濃縮されていることを以前示した。本研究では、DMを選択的に取り込んで形成される微小核の核マトリックスに、DMの間期核内における高次機能となんらかの点で関連したRNAが濃縮されている可能性を検討した。ヒトCOLO 320DM株を使用し、微小核精製法をさらに改良することに成功した。このようにして精製した微小核から、核マトリックスRNAを調製し、それをプローブとして、RNA FISH法により検討した。その結果、微小核にハイブリダイズしたシグナルが見られるとともに、間期細胞核内の特定領域にもシグナルが見られた。このことは、当初の目的の核マトリックスRNAが存在することを示している。そこで、RAP(RNA arbitrarily primed)PCR法を用いて、核マトリックスRNAに比べて微小核マトリックスに濃縮されているRNA分子種の同定を試みた。80種類以上のプライマーの41種類の組み合わせについて検討した結果、微小核マトリックス特異的なバンドを19種同定できた。このようなバンドからcDNAを抽出し、その塩基配列の決定を行った。しかし、得られた配列の大半はrRNAの部分配列であった。その他の配列(4種)については、それをもとにプローブを調製し、RNA FISHにより局在性の解析を行ったが、有意な結果は得られなかった。用いた精製微小核中には、DMのDNAが約8000倍もの高純度で濃縮されていたが、RNAレベルでは、まだ不純物が多かったことが原因であると考えられる。

In many cases, there is an epigenetic factor in the DNA of the chromosome. DM is discharged, and many cells are transformed and differentiated. This is the first time that a cell has been removed from a cell, and the second time that a cell has been removed from a cell. The method for purification of DNA from DNA and DNA from DNA was established. In this study, we investigated the possibility of RNA concentration in micronuclei and internuclei. COLO 320 strain was successfully purified by microfiltration. This is the first time we've had a chance to do this. The result is that the nucleus of a small cell can be seen in a specific area. The original purpose of the nuclear RNA is to show the existence of nuclear RNA. The identification of RNA molecules by PCR and RAP(RNA arbitrarily primed) was studied. More than 80 kinds of species are selected from 41 kinds of groups, and 19 kinds are selected from 19 kinds of groups The cDNA sequence was extracted and the nucleotide sequence was determined. Most of the rRNA sequences are aligned. There are 4 kinds of DNA sequences in the DNA sequence. The DNA of DNA was purified by 8000 times, and the purity of DNA was increased by 8000 times.