悪性形質を運ぶ染色体外遺伝因子の細胞外放出による細胞間水平伝播

通过细胞外释放携带恶性特征的染色体外遗传元件进行水平细胞间传播

• 批准号: 21657051
• 负责人: 清水 典明
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21657051/
• 关键词: 微小核; 染色体外遺伝因子; 遺伝子増幅; double minutes; 細胞質膜ブレッビング; 生細胞タイムラプス; DNA傷害; 核ラミナ

A.染色体外遺伝因子の核外排出について;がん細胞の増幅遺伝子が局在する染色体外遺伝因子(DM)が可視化された細胞株を用いて、タイムラプス実験を繰り返すことにより、間期にDMが核内から細胞質に移動する核出芽現象を明確にした。驚くべきことに、このような核出芽は、細胞質膜のブレッビングに共役していた。そのようなブレッビングは新鮮血清やカンプトテシンによるDNA傷害により誘導されることを見いだした。細胞質膜ブレッビングに共役した核出芽は、細胞接着の状況に依存し、多様ながん細胞で見られることを見いだした。この成果は現在投稿準備中である。B.染色体外遺伝因子を濃縮した微小核の細胞外排出について;微小核を含むブレッブは、間期に千切れることは極めてまれだが、分裂期に千切れて細胞外微小核を生じる場合があることをタイムラプス観察で明らかにした。これは、分裂期に収縮環を切断する酵素活性が上昇することと関連するようである。C.染色体外遺伝因子の安定性を支配する遺伝的背景について;DMを持つ供与細胞と、薬剤耐性マーカーを持つ多種の受容培養細胞との間で細胞融合をすることにより、DMが安定に維持されるには、受容細胞の欠失型遺伝的背景が必要であることが示された。また、異なる生物種間の細胞融合により、染色体が分断化し、DMに酷似した染色体外遺伝因子が生じることを見いだした。これは、がん化にともなってDMが出現することに関する重要な仮説を生んだ。D.染色体外遺伝因子を濃縮した微小核を介する、染色体外遺伝因子の細胞間転移について;細胞外微小核を精製する方法を、改良した。この方法とCの実験系を組みあわせ、DMの細胞間伝播を実証する実験を現在継続して行っている。

A. The exocytic 伝 factor is exonerated from the nucleus に て て て て; が ん cells の rights of heritage 伝 son が bureau in す る extrachromosomal heritage 伝 factor (DM) が visualization さ れ た cell lines を with い て, タ イ ム ラ プ ス be 験 を Qiao り return す こ と に よ り, interphase に DM が intranuclear か ら cytoplasm に mobile す る nuclear budding phenomenon を clear に し た. Shock くべ くべ ような とに とに, <s:1> ような ような, nuclear germination, and cytoplasmic membrane <s:1> ブレッビ グに グに co-play て て た た. そ の よ う な ブ レ ッ ビ ン グ は fresh serum や カ ン プ ト テ シ ン に よ る DNA damage に よ り induced さ れ る こ と を see い だ し た. Cytoplasmic membrane ブ レ ッ ビ ン グ に し total service た nuclear budding は, cells then の に dependent し, many others な が ん cells で see ら れ る こ と を see い だ し た. Youdaoplaceholder0 である the results are being prepared for submission. B. Chromosomal exegesis 伝 factor を condensation た た micronucleus <s:1> excrete に に て て て; Contains small nuclear を む ブ レ ッ ブ は, interphase に thousands cut れ る こ と は extremely め て ま れ だ が, split phase に thousands cut れ て extracellular born small nuclear を じ る occasions が あ る こ と を タ イ ム ラ プ ス 観 examine で Ming ら か に し た. The <s:1> れ するようである and the に constrictive loop を during the mitotic phase cut off the する enzyme activity が and increase the する とと とと association するようである. C. The background of the 伝 factor <s:1> stability を that governs the する heritage 伝 に て て て て て DM を hold つ cell と, and supply 薬 tonic patience マ ー カ ー を hold つ multiple の is let culture cell と の between cell fusion を で す る こ と に よ り, DM が stable に maintain さ れ る に は の owe, the cell loss type but 伝 background が で necessary あ る こ と が shown さ れ た. ま た, different な る の between the biological cell fusion に よ り, chromosome が breaking し, DM に resembles し た extrachromosomal heritage 伝 factor が raw じ る こ と を see い だ し た. こ れ は, が ん change に と も な っ て DM が appear す る こ と に masato す る important な 仮 said を ん だ. D. extrachromosomal heritage 伝 factor を enrichment し た tiny nuclear を interface す る, chromosome heritage 伝 factors の cell planning shift between に つ い て; Extracellular micronucleus を refining する method を, modified <s:1> た. こ の way と C の be 験 department を group み あ わ せ, DM の 伝 sowing を card be す る be 験 を now 継 続 し て line っ て い る.

项目成果

Episomal High Copy Number Maintenance of Hairpin-capped DNA Bearing a Replication Initiation Region in Human Cells

• DOI: 10.1074/jbc.m109.008128
• 发表时间: 2009-09-04
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Harada, Seiyu;Uchida, Masafumi;Shimizu, Noriaki
• 通讯作者: Shimizu, Noriaki

動物細胞の微小核内でのDNA複製に関する研究

动物细胞微核内DNA复制的研究

• 发表时间: 2010
• 作者: 岡本敦志;清水典明
• 通讯作者: 清水典明

ヘアピン化IR/MAR遺伝子増幅法―目的遺伝子を多数の安定な染色体外遺伝因子とする新規な方法

发夹IR/MAR基因扩增方法——一种利用大量稳定的染色体外遗传元件作为靶基因的新方法

• 发表时间: 2009
• 作者: 清水典明;原田清佑
• 通讯作者: 原田清佑

哺乳動物ゲノム由来の染色体外遺伝因子…その細胞内動態と、遺伝子増幅への寄与

来自哺乳动物基因组的染色体外遗传元件......它们的细胞内动力学和对基因扩增的贡献

• 发表时间: 2010
• 期刊: 化学と生物
• 作者: Koh-ichi Utani;Yuka Kohno;Atsushi Okamoto;Noriaki Shimizu;清水典明
• 通讯作者: 清水典明

哺乳動物細胞内で目的遺伝子の増幅構造を制御し、高発現させる方法

一种在哺乳动物细胞中控制靶基因扩增结构并实现高表达的方法。

• 发表时间: 2011