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Analysis of Homologous DNA Recombination using the chicken DT40 B cell line

使用鸡 DT40 B 细胞系进行同源 DNA 重组分析

基本信息

批准号：
17390076
负责人：
TAKEDA Shunichi
金额：
$ 9.09万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17390076/
关键词：
Homologous Recombination Targeted integration DT40 cell Gene targeting Rad18 Ubc13 Fbh1 DNA polymerase 遺伝学癌細胞・組織放射線老化

项目摘要

In higher eukaryotic cells, transfected DNA is occasionally integrated into the genome predominantly through random integration. A novel exception of this rule is chicken B lymphocyte lines, including DT40 cells, in which random integration and targeted one occur with similar frequencies. The goal of this project is to identify the molecular mechanisms underlying the efficient gene targeting in DT40 cells. While the mechanisms have not yet clarified, we have revealed a role of some factors in Homologous DNA Recombination (HR), as delineated below.(1) Yeast Rad18, E3 ubiquitin ligase is essential for postreplicational repair (PRR), but is not involved in HR. We found that Rad18 suppresses the toxic effect of nonhomolgous end-joining, and thereby facilitates HR (Saberi et al., 2007).(2) Ubc13, E3 ubiquitin ligase is involved in a type of PRR, but not in HR in lower eukaryotes. We found that Ubc13 plays a critical role in an initial step of HR dependent DSB repair (Zhao et al., 2007).(3) FBH1 seems to prevent aberrant HR by suppressing the assembly of Rad51 at DNA damage in the fission yeast. In DT40 cells, we found that FBH1 does not affect Rad51 accumulation, but acts in parallel with Bloom helicase to suppress HR at a late step (Kohzaki et al., 2007).

在高等真核细胞中，转染的DNA偶尔主要通过随机整合整合到基因组中。这一规则的一个新的例外是鸡B淋巴细胞系，包括DT 40细胞，其中随机整合和靶向整合以相似的频率发生。本项目的目标是确定DT 40细胞中有效基因靶向的分子机制。虽然机制尚未阐明，但我们已经揭示了一些因素在Homoprotein DNA扩增（HR）中的作用，如下所述。(1)酵母Rad18，E3泛素连接酶是复制后修复（PRR）所必需的，但不参与HR。我们发现Rad18抑制非同源末端连接的毒性作用，从而促进HR（Saberi等人，2007年）。(2)Ubc13，E3泛素连接酶在低等真核生物中参与一种PRR，但不参与HR。我们发现Ubc13在HR依赖性DSB修复的初始步骤中起关键作用（Zhao等人，2007年）。(3)FBH1似乎通过抑制Rad51在分裂酵母中DNA损伤处的组装来防止异常HR。在DT 40细胞中，我们发现FBH1不影响Rad51积累，但与Bloom解旋酶平行作用以在后期抑制HR（Kohzaki等人，2007年）。