HC-Pro/rgsCaMによるRNAサイレンシング阻害の分子機構

HC-Pro/rgsCaM抑制RNA沉默的分子机制

• 批准号: 17780032
• 负责人: 中原 健二
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780032/
• 关键词: RNAサイレンシング; 植物ウイルス; キイロショウジョウバエ; 外来遺伝子発現; RNAi; 植物ウイルス学; 遺伝子発現制御

昨年の研究で、キイロショウジョウバエのS2培養細胞ではCIYVVのHC-ProはRNAサイレンシング抑制能を示さなかったが、HC-Proと相互作用することが知られるタバコのrgsCaMはsiRNA形成後の過程でRNAサイレンシングを抑制することが分かった。次にこれらの遺伝子とともに外来遺伝子ルシフェラーゼの遺伝子がS2細胞のゲノムに組み込まれた安定発現細胞を作成してルシフェラーゼ活性を指標にその発現に対するrgsCaMとCIYVV HC-Proの影響を調べた。なぜなら、安定発現するルシフェラーゼはジーンサイレンシングによる部分的な発現抑制を受けることが知られているからである。その結果、rgsCaMだけでなくCIYVVのHC-Proもルシフェラーゼの発現を上昇させている可能性が示された。そしてこれらの培養細胞のゲノムに組み込まれたルシフェラーゼ遺伝子のコピー数、それから転写されたmRNAの蓄積量、翻訳されたルシフェラーゼタンパク質の蓄積量を相対的に比較したところ、rgsCaMとCIYVVのHC-Proは翻訳以降の過程で発現を促進していると思われた。シクロヘキシミドを培養液に加えて培養細胞の翻訳を止めて、経時的にルシフェラーゼ活性を調べることによりルシフェラーゼタンパク質の分解速度を細胞間で比較したところ、HC-Proの発現の有無で分解速度に差がなかったことから、少なくともCIYVVのHC-Proはルシフェラーゼの翻訳効率を高めることでその発現を促進している可能性が考えられた。

在去年的一项研究中，发现CIYVV HC-PRO并未显示抑制果蝇S2培养细胞中RNA沉默的能力，而是烟草RGSCAM（已知与HC-Pro相互作用，抑制RNA的烟草RGSCAM）在siRNA形成后抑制RNA沉默。接下来，我们创建了稳定的表达细胞，其中将外国基因荧光素酶的基因整合到S2细胞的基因组中，并使用荧光素酶活性作为指标，以研究RGSCAM和CIYVV HC-PRO对其表达的影响。这是因为已知稳定表达的荧光素酶通过基因沉默会部分抑制表达。结果表明，CIYVV中不仅RGSCAM，而且还可以增加荧光素酶表达。当比较整合到这些培养细胞的基因组中的荧光素酶基因的拷贝数，转录的mRNA量以及翻译的荧光素酶蛋白的量时，看来RGSCAM和CIYVV的HC-Pro在随后的翻译过程中促进了表达。当将环己酰亚胺添加到培养基中以停止培养细胞的翻译并检查荧光素酶活性，并比较细胞之间荧光素酶蛋白的降解速率。由于细胞之间的降解速率没有差异，因此认为CIYVV的HC-Pro表达至少可以通过提高荧光素酶的翻译效率来促进其表达。

项目成果

Stem cell division is regulated by the microRNA pathway

• DOI: 10.1038/nature03816
• 发表时间: 2005-06-16
• 期刊: NATURE
• 影响因子: 64.8
• 作者: Hatfield, SD;Shcherbata, HR;Ruohola-Baker, H
• 通讯作者: Ruohola-Baker, H