HC-Pro/rgsCaMによるRNAサイレンシング阻害の分子機構

HC-Pro/rgsCaM抑制RNA沉默的分子机制

• 批准号: 17780032
• 负责人: 中原 健二
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780032/
• 关键词: RNAサイレンシング; 植物ウイルス; キイロショウジョウバエ; 外来遺伝子発現; RNAi; 植物ウイルス学; 遺伝子発現制御

昨年の研究で、キイロショウジョウバエのS2培養細胞ではCIYVVのHC-ProはRNAサイレンシング抑制能を示さなかったが、HC-Proと相互作用することが知られるタバコのrgsCaMはsiRNA形成後の過程でRNAサイレンシングを抑制することが分かった。次にこれらの遺伝子とともに外来遺伝子ルシフェラーゼの遺伝子がS2細胞のゲノムに組み込まれた安定発現細胞を作成してルシフェラーゼ活性を指標にその発現に対するrgsCaMとCIYVV HC-Proの影響を調べた。なぜなら、安定発現するルシフェラーゼはジーンサイレンシングによる部分的な発現抑制を受けることが知られているからである。その結果、rgsCaMだけでなくCIYVVのHC-Proもルシフェラーゼの発現を上昇させている可能性が示された。そしてこれらの培養細胞のゲノムに組み込まれたルシフェラーゼ遺伝子のコピー数、それから転写されたmRNAの蓄積量、翻訳されたルシフェラーゼタンパク質の蓄積量を相対的に比較したところ、rgsCaMとCIYVVのHC-Proは翻訳以降の過程で発現を促進していると思われた。シクロヘキシミドを培養液に加えて培養細胞の翻訳を止めて、経時的にルシフェラーゼ活性を調べることによりルシフェラーゼタンパク質の分解速度を細胞間で比較したところ、HC-Proの発現の有無で分解速度に差がなかったことから、少なくともCIYVVのHC-Proはルシフェラーゼの翻訳効率を高めることでその発現を促進している可能性が考えられた。

In the past year's study, HC-Pro RNA inhibitor activity was demonstrated in cultured S2 cells, and HC-Pro interaction was observed in the process of RNA inhibitor activity after siRNA formation. The second is to modulate the effects of exogenous genes on the development of S2 cells and the development of CIYVV HC-Pro. The development of the system and stability of the system is controlled by the control of the development of the system. As a result, the possibility of CIYVV's HC-Pro-100 development is shown. The number of cells in culture, the amount of mRNA in culture, the amount of protein in culture, and the amount of protein in culture. In addition to the culture medium, the activity of the culture medium is regulated, and the decomposition rate of the culture medium is compared between cells. The decomposition rate of the HC-Pro is higher than that of the CIYVV.

项目成果

Stem cell division is regulated by the microRNA pathway

• DOI: 10.1038/nature03816
• 发表时间: 2005-06-16
• 期刊: NATURE
• 影响因子: 64.8
• 作者: Hatfield, SD;Shcherbata, HR;Ruohola-Baker, H
• 通讯作者: Ruohola-Baker, H