Molecular mechanism of calmodulin-like proteins-mediated recognition and control of viral virulent factors

类钙调蛋白介导病毒毒力因子识别与控制的分子机制

• 批准号: 19F19391
• 负责人: 中原 健二
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-11-08 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19F19391/
• 关键词: カルモジュリン様タンパク質; ATG8; 葉緑体外包膜タンパク質; キュウリモザイクウイルス; 2b; オートファジー; 植物ウイルス; Atg8; 2bタンパク質

受け入れ研究者は、これまでカルモジュリン様タンパク質(CML)とCMV 2bを含むウイルスのRNAサイレンシング抑制タンパク質との相互作用について研究してきた。CMLと2bの相互作用の背景メカニズムを解明するために、昨年までのDr. Akhter特別研究員と受け入れ研究者の研究で、葉緑体外包膜タンパク質がCMLと2b両方と結合することを酵母ツーハイブリッド法により見出した。また、CMV 2bがオートファジーのキー遺伝子であるATG8と結合することを酵母ツーハイブリッド法による試験で見出した。本年度は、これらの結合、すなわち、CMV 2bとCML、CMLと葉緑体外包膜タンパク質、葉緑体外包膜タンパク質とCMV 2b、およびCML 2bとATG8が植物細胞内でも結合するのかどうか、それらのタンパク質とルシフェラーゼの部分断片を融合させた融合タンパク質を一過発現し、結合の有無をルシフェラーゼ活性で測定するsplit luciferase相補解析により検証した。植物細胞での一過発現には、Nicotiana benthamiana葉でのアグロバクテリウムのインフィルトレーションにより一過発現系を用いた。その結果、split luciferase相補解析により植物細胞内においていずれの組み合わせでも結合していることが確かめられた。そこで、これらの結合が、それぞれのタンパク質の機能や役割にどのように関わるのか、検証を進め、葉緑体外包膜タンパク質の高発現下で、CMV 2bの蓄積量が低下して、RNAサイレンシング抑制活性が弱まることが分かった。CMV 2bは葉緑体外包膜タンパク質と結合するとATG8との結合を介したオートファジーによる分解が促進している可能性が考えられた。受け入れ研究者の以前の研究でCMLは2bと結合しオートファジーによる分解に導くことでウイルス防御に関わることを明らかにした。そしてDr. Akhter特別研究員との本研究により、このCMLを介したウイルス防御機構に葉緑体外包膜タンパク質が重要な貢献をしていることが示唆された。

The researchers are interested in studying the interaction between CML and CMV2b, including the interaction between CML and CMV2b. CML 2b Interaction Background: A Case Study of CML 2b Interaction Akhter, Special Researcher, was invited to study the chloroplast envelope. The CMV2b gene was identified by ATG8. This year, the fusion of some fragments of chloroplast envelope, chloroplast envelope, CMV2b, CML2b and ATG8 in plant cells has occurred. The analysis of the split luciferase phase was performed in combination with the presence or absence of the enzyme. The plant cells were used in the development of a new system called Nicotiana benthamiana. The results of the split luciferase complement analysis are as follows: This is due to the combination of these two factors, the improvement of the function and service of the chloroplast membrane, the advancement of testing, the improvement of the chloroplast envelope membrane, the decrease in the accumulation of CMV2b, and the weak inhibitory activity of RNA siRNA. The possibility of CMV2b binding to the chloroplast envelope and ATG binding to the chloroplast envelope is examined. The CML is a combination of the previous studies of the researchers.そしてDr. Akhter, Special Fellow, made important contributions to this study, including the development of chloroplast defense mechanisms.

项目成果

Incidence and diagnosis of major watemelon diseases in Bangladesh

孟加拉国西瓜主要病害的发生及诊断

• 发表时间: 2020
• 作者: Akhter;MDS.;Rhman;MS.;Jahan;K-E.;Rahman;MZ.;Faruk;MI.;Elahi;F-E.;Khatun;F
• 通讯作者: F