有機溶媒耐性大腸菌を用いた有機溶媒耐性生体触媒の開発

利用耐有机溶剂大肠杆菌开发耐有机溶剂生物催化剂

• 批准号: 17780066
• 负责人: 道久 則之
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Toyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780066/
• 关键词: 有機溶媒; 有機溶媒耐性; 有機溶媒耐性微生物; 大腸菌; 有機溶媒耐性大腸菌; 有機溶媒耐性生体触媒; AcrAB; 溶媒排出ポンプ

本研究の目的は、大腸菌の有機溶媒耐性変異株を宿主として用いて溶媒存在下における疎水性物質変換反応を行い、高度溶媒耐性大腸菌の溶媒存在下における変換菌としての有用性について明らかにすることである。既に取得している有機溶媒耐性大腸菌を親株として用いて、さらに有機溶媒耐性度の向上した新規な有機溶媒耐性大腸菌の取得を行なった。毒性の強い有機溶媒を重層した培地を用いて大腸菌を培養し、生育した有機溶媒耐性変異株を分離した。大腸菌の有機溶媒耐性には薬剤排出タンパク質であるAcrAB-TolCポンプが関与していることが知られており、これらタンパク質の発現を調節している複数の転写制御因子が同定されている。これら転写制御因子のうちの1つが取得した有機溶媒耐性変異株の有機溶媒耐性に関与していることを見出した。また、これら有機溶媒耐性向上変異株のうち特に有機溶媒耐性度の高かった変異株のタンパク質発現を解析し、親株と比較して発現量が増加しているタンパク質を同定した。変異株の膜タンパク質と菌体内タンパク質を分離して調べた結果、膜タンパク質において顕著なタンパク質発現量の変化が確認された。これらタンパク質の有機溶媒耐性への関与を調べるために、各遺伝子を破壊株した株を構築し、有機溶媒耐性を調べた。この結果、浸透圧調節に関わるタンパク質が、有機溶媒耐性に関与することが示唆された。さらに、取得した変異株に芳香族化合物酸化酵素であるインドールからインジゴ(青色の染料)を生成する酵素をコードする遺伝子を導入し、形質転換体を作製した。現在、この形質転換体を水-有機溶媒の2相培養液を用いて培養し、インジゴ生産性を検討した。この結果、溶媒存在下において親株(非有機溶媒耐性株)よりも、変換効率が向上した有機溶媒耐性変異株を取得できたことを確認した。

The purpose of this study is to determine whether the host of organic solvent-tolerant strains can be used in the presence of water-borne substances in the presence of organic solvent-tolerant strains and highly tolerant strains in the presence of organic solvent-tolerant strains. Both the tolerance of organic solvent and the tolerance of organic solvent of bacteria strains were improved. Virulent and strong organic solvent strains were isolated from strains of organic solvent tolerant strains of bacteria and fertile bacteria in the field. The bacteria have the ability to dissolve the virus. The solvent tolerance test shows that the control factor is the same as that of the control factor. The AcrAB-TolC is the same as that of the control factor. In this paper, we write the control factor in order to obtain the organic solvent tolerance test, the organic solvent tolerance test and the control factor. The tolerance of organic solvents is up-regulated. The tolerance of organic solvents is higher than that of control. The results showed that the bacteria were isolated from each other in vivo. The results showed that the bacteria were isolated from each other. The results showed that the bacteria were separated from each other. There are two kinds of drugs for organic solvent tolerance, one for organic solvent tolerance, one for organic solvent tolerance, and one for organic solvent tolerance. The results of the test, impregnation test, organic solvent tolerance test and solvent tolerance test were used to indicate the instigation of the drug. The aromatic compound acidifying enzyme was obtained and the aromatic compound acidified enzyme was obtained. The aromatic compound acidified enzyme (cyan dye) was obtained. At present, the water-organic solvent 2-phase culture solution is used in the production of organic solvent. The results showed that in the presence of solvent, the strain (non-organic solvent tolerant strain) was positive, and the positive rate was higher than that of organic solvent tolerant strain (non-organic solvent tolerant strain).