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ヘテロ5量体コレラ毒素B鎖/ワクチン抗原融合蛋白の機能解析と粘膜ワクチンへの応用

异五聚体霍乱毒素B链/疫苗抗原融合蛋白的功能分析及其在粘膜疫苗中的应用

基本信息

批准号：
17780231
负责人：
新川武
金额：
$ 2.18万
依托单位：
University of the Ryukyus
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、コレラ毒素B鎖(CTB)を粘膜ワクチン運搬分子として機能させるための技術基盤を構築することである。これまでにへテロ5量体CTB分子構築技術を確立したが(Harakuni et al.,Infect Immune 2005;73:5654-65)今年度は特にこの分子構築技術の汎用性の高さを示すための実験を行った。即ち、融合化するワクチン抗原の種類や発現宿主に影響されない応用的的発展を目指すことである。その一環として、(1)大腸菌発現系によるヘテロ5量体形成効率に関する実験系と(2)ヘテロ5量体DNAワクチン実験系(哺乳動物細胞発現)を確立した。大腸菌発現系の実験では、これまで大腸菌では分泌発現しない(或いは極めて微量)と報告されていたCTBやLTB分子(CTBと類似の機能をもつ毒素原性大腸菌由来の腸管毒素B鎖蛋白質)が5量体の形状で高発現される可能性を見出し、今後の分子構築の技術的基盤を確立したと考えている。更に、狂牛病に対する家畜用粘膜ワクチンを構築する一環として、LTB鎖とプリオン抗原との融合分子を構築し、その動物実験での免疫原性を確認した。また、日本住血吸虫症に対する家畜用ワクチンの融合分子構築にも成功しており、今後更に感染防御機能を解析する予定である。ヘテロ5量体CTB DNAワクチンの実験系では、モデル抗原としてマラリア伝搬阻止ワクチン候補抗原を用い、これまで構築した数種類のヘテロ型DNAワクチンを293細胞へ導入した結果、酵母発現系と同様、ヘテロ型の方がホモ型分子より高効率で分泌発現されていることが分かった。特に、三日熱、熱帯熱の抗原遺伝子をタンデムにCTBと融合させた分子は、ヘテロ型としてのみ分泌発現されることが確認された。これらのコンストラクトを遺伝子銃や筋肉内注射等の各種ルートで免疫した結果、ヘテロ型の有意性が示唆されたが、全体として抗体誘導能が低く、今後更に改良が必用と思われる。また、前年度から使用している酵母発現系では、三日熱、熱帯熱マラリアワクチン抗原とのヘテロ型融合分子の分泌発現に成功しており、今後その感染防御機能を解析する予定である。

The purpose of this study is to construct a technical basis for the function of CTB toxin B (CTB), a mucosal transport molecule, and its function.これまでにへテロ 5-dimensional CTB molecular construction technology has been established (Harakuni et al., Infect Immune 2005;73:5654-65) This year's special molecular construction technology has demonstrated its high versatility. In other words, the type of fused antigen is the one that affects the host and affects the development of the antigen used.その一cyclic として, (1) coliform strain によるヘテロ5 quantitative body formation efficiency に关する実験The system of (2) Teuton five-dimensional DNA system (mammalian cell system) has been established. The secretion of coliform bacteria is the secretion of coliform bacteria (or the secretion of coliform bacteria)めて Trace amount)とreportされていたCTBやLTB molecule (CTBとsimilar functionをもToxigenic coliform origin of enterotoxin B-locked protein) has a high possibility of 5-dimensional body shape, and the basis for future molecular construction technology has been established. Update, mad cow disease prevention, livestock mucous membrane construction, one ring construction, LTB lock The プリオオンantigen and the fusion molecule were constructed and the immunogenicity of the animal was confirmed.また、Japanese schistosomiasis-resistant fusion molecule construction for domestic animals has been successfully constructed. In the future, the infection defense function will be analyzed and determined.ヘテロ5 volume CTB DNA ワクチンの実験式では, モデルantigen としてマラリア伝den movement prevention The ワクチン candidate antigen is constructed using い and これまで to create several types of のヘテロ type DNA The results of the introduction of ワクチンを293 cells, the yeast strain is the same, and the ヘテロ type The の方がホモ-type molecule has a high efficiency and is secreted by the molecule.特に、三日热、热帯热のantigen伝子をタンデムにCTBとfusionさせたmolecule は, ヘテロ type としてのみ secretion appears されることがconfirm された. Various types of immunity including intramuscular injection of これらのコンストラクトを伝子铳や intramuscular injection, and ヘテロ type The intentionality of the test is low, and the overall antibody induction ability is low. It will be improved in the future and must be used.また, the previous year's から used している yeast present system では, three-day fever, hot and hot マラリアワクチンantigen とのThe secretion of TNT-type fusion molecules has been successfully demonstrated, and the analysis of the infection defense function in the future has been determined.