TMXの機能異常を引き起こす構造的要因の解明

阐明导致 TMX 功能障碍的结构因素

• 批准号: 17790083
• 负责人: 小橋 信行
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790083/
• 关键词: TMX; 結晶構造解析; thioredoxin

本研究の目的はTMXの機能異常を引き起こすことが示唆されているTMX結合化合物FRが具体的にどのようなメカニズムで作用するのかを明らかにすることである。そのためにTMXと結合するものの機能異常は引き起こさない化合物としてPAOをコントロールとしてnative・FR複合体・PAO複合体それぞれの立体構造上の差異からメカニズムを推論する方法を選んだ。よって本研究では結晶化を行うための十分な品質・量の精製TMXを得ることが第一段階の実験であった。昨年度までは品質的には十分と予想されるサンプルが得られたが量的に不十分であり結晶化条件の本格的なスクリーニングを行うことが出来なかった。本年度は発現するTMXの領域を変更して大量生産系の構築を目指した。発現に用いる大腸菌種・発現誘導タイミング・培養温度をパラメーターとして詳細に発現条件の検討を行った。しかしながら結晶化条件スクリーニングに必要なミリグラムオーダーのTMXを得るにはいたらなかった。次にこれまで用いてきたGST融合発現系ではなくより分子量の大きいMBPとの融合で発現系を構築し発現条件の検討を行った。するとリッター当たり2mgの精製TMXを得ることに成功した。得られたサンプルを用いてHAMPTON Crysta1 Screen I/II、 Emerald Bio Systems Wizard I/II/IIIを用いて結晶化条件のスクリーニングを行ったが結晶を得るにはいたらなかった。現状ではTMXサンプルの精製度や安定性に問題があることが示唆されるため、今後スクリーニングを継続するにあたってはMBPを用いたアフィニティー精製に加えて陰イオン交換クロマトグラフィー等の精製段階を追加することや動的光散乱の測定を通じてTMXがより安定なバッファー条件の検討が必要であると考えられる。

The purpose of this study is to demonstrate the specific effect of the compound FR (FR) on the molecular mechanism of TMX, which is used to demonstrate the specific effect of the compound. The combination of the traditional TMX and the remote control machine can often induce the formation of the compound compound, the compound PAO, the complex native, the FR complex, the PAO complex, the stereotaxis, and the method of predicting the accuracy of the stereoscopic method. The results of this study showed that the first paragraph of the study was obtained by measuring the amount of fine TMX in the first paragraph. In the last year, the quality of the market is very serious. I would like to know that the volume of the product is not very high. The crystallization conditions of this box are very important. This year, we have seen a large number of students in the field of TMX. It is possible to use large strains of bacteria to improve the temperature, temperature, temperature and temperature. Because of the crystallization conditions, it is necessary to obtain the necessary information on the crystallization of the TMX. In this paper, we use the method of GST fusion to determine the molecular weight, the MBP fusion, the fusion condition, the performance condition and the operation condition. Thank you for your success when you 2mg your TMX. The results show that the crystallization conditions of the HAMPTON Crysta1 Screen I/II and the crystallization conditions of the Emerald Bio Systems Wizard I/II/III are very high. The shape of the TMX, the precision, the stability, the stability, the accuracy, the stability, the safety, the stability, the safety, the stability, the stability, the safety, the stability, the accuracy, the stability, the accuracy, the stability, In the future, you will need to know that you need to use the MBP system to improve the precision of the communication system. In the future, you will need to add the light dispersion measurement of the operation of the system, such as the precision section of the system, such as the communication system. In the future, you will find that it is necessary to determine the conditions of the TMX system.