蛋白質-蛋白質相互作用阻害剤の探索を指向した新規化合物評価システムの開発

开发一种新的化合物评估系统，旨在寻找蛋白质-蛋白质相互作用抑制剂

• 批准号: 17790091
• 负责人: 大石 真也
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790091/
• 关键词: 蛋白質-蛋白質相互作用; スクリーニング; 膜融合; 抗HIV剤; ペプチド; HIV; gp41; 化学合成ペプチド; HIV-1; シグナル伝達; 抗がん剤; キナーゼ

平成18年度に引き続き、HIV-1のウイルス膜と細胞膜の融合過程を阻害する抗HIV剤の効率的な探索法の確立を行った。HIV-1 gp41のHR1領域に親和性を有し、HR1-HR2のcoiled-coil構造の形成を阻害して抗HIV作用を示す化合物を選抜するために、まずHR1領域のペプチドであるN36のN末端タグを検証した。当初予定していたビオチンペプチドの利用では、ビーズ上のストレプトアビジンの担持量が少なく、期待されたHR2ペプチドのLC-MSでの分析が困難であった。このため、市販のNi-NTA樹脂およびこれに結合するHisタグ化HR1ペプチドを利用したところ、微量のペプチド混合物の中から活性体のペプチドが有意に選抜されることを確認した。つづいて、すでに上市された膜融合阻害剤Fuzeonに対するHIV耐性株において認められるHR2領域138位の変異獲得メカニズムの解明と、昨年度の研究により見出したT-20EKの高活性誘導体の探索に本法を応用した。まず、HR2ペプチドSC35EKのSer138をCysを除く各種天然アミノ酸に置換したペプチドライブラリー(19種類の混合物)をスプリットーミックス法で構築した。この混合物にHisタグN36を添加して緩衝液中でインキュベーションした後、Ni-NTAを添加してHR1-HR2複合体をプルダウンにより回収し、酢酸水溶液処理後LC-MS分析に付したところ、138位置換HR2ペプチドは、置換アミノ酸がAla、Ser、Thr、Gly、Met、Leu、Valの順に多く回収された。この回収率は、別途パラレル法により合成して評価した抗HIV活性と一致し、HR1-HR2間の結合親和性が抗HIV活性と相関していることが示唆された。また、138位のAla変異によるT-20耐性獲得は、HR1-HR2間の結合親和性の向上によることが示唆された。

In 2018, we conducted research on the prevention of HIV-1 cell membrane fusion and the establishment of effective anti-HIV agents. HIV-1 gp41 and HR1 domain affinity, HR1-HR2 coiled-coil structure formation and anti-HIV effect of compounds selected to prevent, and HR1 domain N36 and N36 N-terminal site identification It is difficult to analyze the LC-MS of HR2 when it is determined that the utilization of HR2 is insufficient and the burden of HR2 is insufficient. This is a confirmation that the Ni-NTA resin in the market is intentionally selected for use in the production of HR1. The present study was carried out to identify a highly active inducer of T-20EK in HIV-resistant strains. In addition to the natural acids, HR2, SC35EK, Ser138 and Cys, the structure was constructed by the substitution method (19 kinds of mixtures). After the addition of N36 to the mixture, the HR1-HR2 complex was recovered by addition of Ni-NTA, and the HR2 complex was analyzed by LC-MS after treatment with acetic acid aqueous solution. The HR2 complex was replaced by Ala, Ser, Thr, Gly, Met, Leu and Val. The anti-HIV activity of HR1-HR2 was correlated with the binding affinity of HR1-HR2. T-20 tolerance was obtained by the change of Ala at position 138, and the upward change of binding affinity between HR1 and HR2 was demonstrated.

项目成果

EK-コンセプトを利用した高活性HIV膜融合阻害剤の創製研究

利用EK概念创建高活性HIV膜融合抑制剂的研究

• 发表时间: 2007
• 作者: Katoh M.;Ueda S.;Inuki S.;Oishi S.;Ohno H.;Fujii N.;鳴海哲夫;Hiroki Nishikawa;Shinya Oishi;Oishi S.;田中理紀
• 通讯作者: 田中理紀

Design and synthesis of downsized metastin (45-54) analogs with maintenance of high GPR54 agonistic activity

• DOI: 10.1016/j.bmcl.2005.09.054
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS
• 影响因子: 2.7
• 作者: Niida, A;Wang, ZX;Fujii, N
• 通讯作者: Fujii, N

Fmoc-based solid-phase synthesis of GPR54-agonistic pentapeptide derivatives containing alkene- and fluoroalkene-dipeptide isosteres

• DOI: 10.1002/bip.20676
• 发表时间: 2007-01-01
• 期刊: BIOPOLYMERS
• 影响因子: 2.9
• 作者: Tomita, Kenji;Narumi, Tetsuo;Fujii, Nobutaka
• 通讯作者: Fujii, Nobutaka

ペプチド・蛋白質化学を基盤とする新興・再興感染症治療薬の創製

基于肽和蛋白质化学创造新发和再发传染病的治疗药物

• 发表时间: 2008
• 作者: Niida;A. et al.;渡辺健太郎;増田亮;渡部毅;大石真也
• 通讯作者: 大石真也

Direct synthesis of 2-(aminomethyl)indoles through copper(I)-catalyzed domino three-component coupling and cyclization reactions

• DOI: 10.1002/anie.200604342
• 发表时间: 2007-01-01
• 期刊: ANGEWANDTE CHEMIE-INTERNATIONAL EDITION
• 影响因子: 16.6
• 作者: Ohno, Hiroaki;Ohta, Yusuke;Fujii, Nobutaka
• 通讯作者: Fujii, Nobutaka