アルブミン遺伝多型を利用した抗酸化型組換えアルブミンの分子設計

利用白蛋白遗传多态性进行抗氧化型重组白蛋白的分子设计

• 批准号: 17790127
• 负责人: 安楽 誠
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790127/
• 关键词: アルブミン; 遺伝子組換え; 抗酸化能; 体内動態; システイン残基; 抗原性; 構造特性; メチオニン残基; 臨床応用

本研究は,当研究室において構築された遺伝子組換え技術を基に,安全性及び有効性に優れた,特に抗酸化能を有するアルブミン製剤を開発することを目的として企図された.抗原性を考慮して,ヒト異型アルブミン(variant)に着目し,1残基置換variantの抗酸化能を評価した.その結果,ヒト血清アルブミン(HSA)の抗酸化能に関与するアミノ酸残基として,^3His,^<122>Val,^<410>Arg及び^<505>Gluが,HSA自身の構造及び機能を維持する上で必須なアミノ酸残基として機能している可能性が強く示唆された.そこで,特に抗酸化能が顕著であった^<410>ArgをCysに変異したvariant R410Cに着目し,yeast-E.coliのシャトルベクターpHIL-D2上でAOX1のプロモーター下流にシグナル配列とポリA配列を含むHSAcDNAを挿入した発現ベクターを作製し,部位特異的に変異させた後(^<410>ArgをCysに置換),このベクターでPichia pastoris(GS115株)を形質転換し,BMMY培地培養後,培地上清より60%硫安分画により濃縮を行い,Blue Sepharose CL-6Bを用い,R410Cを精製した.アルブミンミュータントR410Cにおいて,その構造・体内動態特性について検討した結果,CDスペクトル法により,変異による構造変化は観察されなかった.また,ラットにR410Cを静脈内投与し血中半減期を検討した結果,血漿由来のアルブミン(pHSA)と比較して若干の消失の促進が観察された.以上の結果から,遺伝子組換えアルブミンとして設計されたR410Cは,ヒト由来のvariantであるため,抗原性の心配がないことに加えて,抗酸化能という新たな機能を有したアルブミン製剤として機能する可能性が強く示唆された.

This study は when laboratory に お い て build さ れ た heritage 伝 subgroups in を base に え technology, security and び have sharper に optimal れ た, specially に the acidification can have す を る ア ル ブ ミ ン system tonic を open 発 す る こ と を purpose と し て enterprise 図 さ れ た. Antigenicity を consider し て, ヒ ト alien ア ル ブ ミ ン (variant) に し, 1 residue displacement variant の acidification can を resistance rating 価 し た. そ の results, ヒ ト serum ア ル ブ ミ ン resistance (HSA) の acidification can に masato and す る ア ミ ノ acid residues と し て, ^ 3 ihs, ^ < 122 > Val, ^ < 410 > and Arg び ^ < 505 > Glu が, HSA の structure and function of び を maintain す る で must な ア ミ ノ acid residues と し て function し て い る strong possibility が く in stopping さ れ た. そ こ で, specially に the acidification can が 顕 the で あ っ た ^ < 410 > Arg を Cys に - different し た variant R410C に mesh し, yeast - e.c. with our fabrication: oli の シ ャ ト ル ベ ク タ ー pHIL - D2 で AOX1 の プ ロ モ ー タ ー obscene に シ グ ナ ル go と ポ リ contains A match column を む HSAcDNA を scions into し た 発 now ベ ク タ ー を as し, site specific に - different さ せ た after (^ < 410 > Arg を Cys に After culturing with BMMY, <s:1> ベ ベ タ タ で で で で で で the morphology of Pichia pastoris(GS115 strain)を was replaced with 転. Then, after culturing with bmmy, the serum on the culture was よ <s:1> 60% thione fractions and によ <e:1> concentrated in を rows ベ, and Blue Sepharose was used CL - 6 b を い, R410C を refined し た. ア ル ブ ミ ン ミ ュ ー タ ン ト R410C に お い て, そ の structure dynamic characteristics, the body に つ い て beg し 検 た results, CD ス ペ ク ト ル method に よ り, - different に よ る structure - the は 観 examine さ れ な か っ た. ま た, ラ ッ ト に R410C を intravenous and し blood of half life を 検 To investigate the results of た た, the origin of plasma is ア ア ブ ブ ブ (pHSA)と, compared with て て, the disappearance of several plays promotes が観 observation された. の above results か ら, heritage 伝 subgroups in え ア ル ブ ミ ン と し て design さ れ た R410C は, ヒ ト origin の variant で あ る た め, antigenicity の heart with が な い こ と に plus え て, resistance to acidification can と い う new た な function を have し た ア ル ブ ミ ン system tonic と し て function す る strong possibility が く in stopping さ れ た.

项目成果

The structural and pharmacokinetic properties of oxidized human serum albumin, advanced oxidation protein products (AOPP)

• DOI: 10.2133/dmpk.21.140
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: DRUG METABOLISM AND PHARMACOKINETICS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Iwao, Yasunori;Anraku, Makoto;Otagiri, Masaki
• 通讯作者: Otagiri, Masaki

Chromium(III) ion and thyroxine cooperate to stabilize the transthyretin tetramer and suppress in vitro amyloid fibril formation.

铬(III)离子和甲状腺素协同稳定转甲状腺素蛋白四聚体并抑制体外淀粉样原纤维的形成。

• 发表时间: 2006
• 期刊: FEBS Lett. 580(2)
• 作者: Sato T;Ando Y;Susuki S;Mikami F;Ikemizu S;Nakamura M;Suhr O;Anraku M;Kai T;Suico MA;Shuto T;Mizuguchi M;Yamagata Y;Kai H.
• 通讯作者: Kai H.

Effect of olmesartan on oxidative stress in hemodialysis patients

• DOI: 10.1291/hypres.30.395
• 发表时间: 2007-05-01
• 期刊: HYPERTENSION RESEARCH
• 影响因子: 5.4
• 作者: Kadowaki, Daisuke;Anraku, Makoto;Otagiri, Masaki
• 通讯作者: Otagiri, Masaki

The role of N-acetyl-methioninate as a new stabilizer for albumin products

• DOI: 10.1016/j.ijpharm.2006.08.014
• 发表时间: 2007-02-01
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL OF PHARMACEUTICS
• 影响因子: 5.8
• 作者: Anraku, Makoto;Kouno, Yousuke;Otagiri, Masaki
• 通讯作者: Otagiri, Masaki

Oxidation and carboxyl methyl lysine (CML)-modification of albumin ; possible involvement in the progression of oxidative stress in hemodialysis patients.

白蛋白的氧化和羧甲基赖氨酸 (CML) 修饰；

• 发表时间: 2005
• 期刊: Hypertension Res. 28
• 作者: Ueo H;Motohashi H;Katsura T;Inui K.;Ueo H.et al.;Uwai Y.et al.;Daisuke Kadowaki;Kazuki Shimoishi;Makoto Anraku;Iwao Y.;Iwao Y.;Sato T.;Anraku M.
• 通讯作者: Anraku M.