多価不飽和脂肪酸によるマイクロドメイン形成と消化管薬物吸収促進作用との関連性

多不饱和脂肪酸形成微结构域与胃肠道药物吸收促进作用的关系

基本信息

批准号：
17790133
负责人：
大貫義則
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Hoshi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

様々な生理活性作用が知られる多価不飽和脂肪酸を食品や製剤添加物として消化管に適用すると、細胞膜マイクロドメインの形成変化が起こり、それによって薬物吸収性などの膜機能が変化するとの仮説を立て、モデル膜や培養細胞を用いた検討を行った。まず、組成の異なるモデル膜に各種脂肪酸を適用し、界面活性剤不溶性膜画分量や蛍光異方性などの測定を行った。その結果、ドコサヘキサエン酸(DHA)やエイコサペンタエン酸(EPA)の多価不飽和脂肪酸は、コレステロールを含まない膜に対しては非常に強力な膜流動化作用を示すものの、コレステロールを含む膜に対しては、その作用が著しく減弱することが明らかになった。さらに、オレイン酸のような不飽和脂肪酸と作用を比較したところ、両者の膜への作用様式は異なっていた。以上の結果から、多価不飽和脂肪酸がマイクロドメインの形成を促進させる可能性を見出した。すなわち、多価不飽和脂肪酸はコレステロールが豊富に含まれる膜領域(マイクロドメイン)には作用せず、膜に対して不均一に作用するため、結果として流動性の高い膜領域と低い膜領域の相分離を助長して、マイクロドメインの形成を促進する可能性が考えられる。続いて、この考察をもとに培養細胞(Caco-2)を用いて検討を行った。検討として、多価不飽和脂肪酸を適用した細胞から、界面活性剤不溶性膜画分と可溶性膜画分を分画し、それぞれのフラクションに含まれる膜タンパク量を評価した。なお、本研究では対象とする膜タンパクに、マイクロドメインへの分布が報告されているP糖タンパク(P-gp)を選択した。その結果、多価不飽和脂肪酸を適用しても、各フラクションのP-gp量に目立った変化は認められなかった。したがって、現在までのところ、モデル膜での結果を支持するような結果は得られていない。今後は条件を変えてさらに検討を進める予定である。

我们假设，当以各种生理活性作用而闻名的多不饱和脂肪酸被应用于胃肠道作为食物和制剂添加剂，会导致细胞膜微域的变化，从而导致膜功能的变化，例如吸收药物，并使用模型膜和培养的培养细胞进行了研究。首先，将各种脂肪酸应用于具有不同组成的膜模型，并用表面活性剂 - 不溶性膜馏分和荧光各向异性制成测量。结果，发现多不饱和的脂肪酸，例如二十二碳六烯酸（DHA）和eicosapentaenoic酸（EPA）表现出非常强大的膜流化效应，对胆固醇的膜效应非常强，但它们的影响显着降低了胆固醇含有胆固醇的膜的影响。此外，当将作用与不饱和脂肪酸（例如油酸）进行比较时，两者在膜上的作用都不同。从上述结果中可以发现，多不饱和脂肪酸可以促进微域的形成。也就是说，多不饱和脂肪酸不作用于富含胆固醇的膜区域（微域），而是对膜上的异质作用，因此可能导致高度流动的膜区域和低膜区域之间的相位分离，从而促进微域的形成。接下来，基于此考虑，该研究是使用培养细胞（CACO-2）进行的。作为一项研究，将表面活性剂不溶性膜级分和可溶性膜级分从施加多不饱和脂肪酸的细胞中分离，并评估了每个馏分中包含的膜蛋白量。在这项研究中，据报道分布在微域中的P-糖蛋白（P-GP）被选为靶膜蛋白。结果，即使应用了多不饱和脂肪酸，也没有观察到每个馏分中P-gp量的明显变化。因此，迄今为止，尚未获得支持模型膜结果的结果。将来，我们计划改变条件并进一步考虑这一点。