細胞内CI^-によるCdc25B活性制御を介した細胞周期制御メカニズムの解明

通过细胞内 CI^- 调节 Cdc25B 活性阐明细胞周期控制机制

• 批准号: 17790154
• 负责人: 宮崎 裕明
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790154/
• 关键词: MKN28; MKN45; NKCCl; G0; G1期遅延; 細胞内Cl-濃度; cyclin; p21; MKN-28; MKN-45; 細胞増殖; 細胞周期; Na^+,K^+,2Cl^- cotransporter; furosemide; G1 arrest

ヒトの胃癌由来細胞株であるMKN28,45は、低分化型(MKN45)、中分化型(MKN28)に分類されており、それぞれ細胞増殖速度が異なる。本研究では、細胞内Cl^-濃度の変化が細胞増殖速度を制御するという実験仮説に基づき、細胞内Cl^-イオン濃度に影響を与えるNa^+,K^+,2Cl^- cotransporter(NKCC1)の発現・活性レベル、およびNKCCの特異的阻害剤で処理した際の細胞増殖、および細胞周期に与える影響について、両細胞間での比較を行った。Real-time PCRによりNKCC mRNA発現レベルを測定したところ、MKN45のNKCC mRNAレベルは、MKN28よりも高かった。NKCC阻害剤感受性容積減少率により測定したNKCC機能活性は、MKN45でより高かった。NKCC阻害薬は、NKCC機能活性の高いMKN45においてのみ、G0/G1期遅延による増殖抑制効果を示した。NKCCの機能阻害により細胞内Cl^-濃度低下を介した細胞増殖抑制が想定されることから、低Cl^-濃度培地によりMKN細胞を培養したところ、G0/G1期遅延による増殖抑制効果を示した。また、G0/G1期からS期への進行を促進するcyclin E/CDK2およびcyclin D/CDK4・6の機能を阻害するp21タンパクの解析を行ったところ、低Cl^-濃度培地で培養した細胞において、p21タンパクの発現量が有意に上昇していた。本研究により、Cl^-輸送体の活性変化による細胞内Cl^-濃度の変化がcdc25をはじめとする細胞周期関連タンパク質の活性化を制御することで、細胞増殖をコントロールしている可能性が強く示唆された。

MKN28,45, MKN45, MKN28 were classified as poorly differentiated, and MKN28 as moderately differentiated. In this study, the effects of Cl^-concentration on cell proliferation were compared between Na^+,K^+, 2Cl ^- cotransporter(NKCC1) and the effects of Na^+,K^+, 2Cl ^-concentration on cell proliferation and cell cycle. Real-time PCR was used to detect NKCC mRNA expression, MKN45 mRNA expression and MKN28 mRNA expression. NKCC resistance capacity reduction rate was measured. NKCC functional activity was measured. MKN45 was measured. The effects of NKCC inhibitory drugs on proliferation are demonstrated by the high functional activity of NKCC in MKN45 and the delay in G0/G1 phase. NKCC functional inhibition is mediated by low intracellular Cl^-concentration, which inhibits proliferation of MKN cells cultured in medium with low Cl^-concentration. The expression of p21 protein in cells cultured at low Cl_(2) concentration was increased intentionally. This study strongly suggests the possibility that changes in intracellular Cl^-concentration, cdc25, and cell cycle regulation of Cl^-transporter activity may be involved in cell proliferation.

项目成果

New concept of spare receptors and effectors

• DOI: 10.1007/s00232-004-0729-0
• 发表时间: 2005-01-01
• 期刊: JOURNAL OF MEMBRANE BIOLOGY
• 影响因子: 2.4
• 作者: Marunaka, Y;Niisato, N;Miyazaki, H
• 通讯作者: Miyazaki, H

Physiological significance of hypotonicity-induced regulatory volume decrease:: reduction in intracellular Cl- concentration acting as an intracellular signaling

• DOI: 10.1152/ajprenal.00244.2006
• 发表时间: 2007-05-01
• 期刊: AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-RENAL PHYSIOLOGY
• 影响因子: 4.2
• 作者: Miyazaki, Hiroaki;Shiozaki, Atsushi;Marunaka, Yoshinori
• 通讯作者: Marunaka, Yoshinori

Aldosterone-induced abnormal regulation of ENaC and SGK1 in Dahl salt-sensitive rat

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2005.12.194
• 发表时间: 2006-03-10
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Aoi, W;Niisato, N;Marunaka, Y
• 通讯作者: Marunaka, Y

Action of neltenexine on anion secretion in human airway epithelia.

neltenexine 对人气道上皮细胞阴离子分泌的作用。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun 356(4)
• 作者: Niisato N;Hasegawa I;Tokuda S;Taruno A;Nakajima K;Miyazaki H;Iwasaki Y;Marunaka Y.
• 通讯作者: Marunaka Y.

UT-B1 urea transporter plays a noble role as active water transporter in C6 glial cells.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2006.10.097
• 发表时间: 2006-12
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Aya Ogami;H. Miyazaki;N. Niisato;T. Sugimoto;Y. Marunaka