ヒト腫瘍におけるEph/Ephrinファミリーおよびその周辺蛋白の発現機能解析

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Eph familyの中で、大腸癌症例において、腫瘍部での発現が低下していることが示されているEphA7の解析を行っている。細胞生物学的な解析にあたり、pQCXIN vector (retro virus vector)を用いた発現vectorを制作した。制作されたものはEphA7のC端にEGFPのついたEphA7-EGFP、 Ephrin binding domainのないEphA7(-Elbd)-EGFP、 Extracellular domainのないEphA7(-etracellular)-EGFP、 kinase domain以下のないEphA7(-KD)-EGFP、 SAm domain以下のないEphA7(-SAM)-EGFPとcontrolのEGFPである。上述のものを、大腸癌細胞株HCT116を用いて解析を行った。HCT116はEphA7がhypermethylationによって発現低下していることが示されている。さらに今回、EphrinA1-5がmRNAレベルで発現していることが確認された。各constructがHCT116でどのように局在するか観察した。その結果、全長、-KD、-SAMで細胞膜に局在した。これは一般的にいわれていることと矛盾しない。しかし、-Elbdや-extracellularで細胞内にびまん性に局在した。これはEphA7のN端側に膜移行signalがあるといわれていることに矛盾しない。細胞挙動については、細胞増殖やsoft agarにおいてEphA7とcontrol間で差が認められ、EphA7がある方が細胞増殖は抑制され、colony形成も抑制された。今後それぞれのdomainを削ったものにおける細胞挙動の差を観察し、expression arrayや免疫共沈法等でEphA7発現低下における癌進展のsignal経路を同定する。