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バックフラッシュ/カラムスイッチング法による血中薬物及び代謝物の迅速一斉分析

使用反吹/柱切换方法快速同时分析血液药物和代谢物

基本信息

批准号：
17790417
负责人：
有信哲哉
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は,ヒト血清試料の直接注入を可能とするバックフラッシュ/カラムスイッチングシステムの構築と,高速液体クロマトグラフィー(HPLC)/質量分析法(MS)の諸条件の再検討を行った。本システムでは,トラップカラムとしてWaters社製Oasis HLBカートリッジカラムを,分離分析用カラムとしてMerck社製Chromolith Performance RP-18e(100x4.6mm i.d)を採用した。また,本システムにおいては,サンプル注入量を400μLに設定することが可能となった。本手法の評価を,ヒトブランク血清にフェノチアジン標品を添加したサンプルを用いて行った。その結果,目的成分であるフェノチアジンは漏出することなくOasis HLBカートリッジカラムに保持され,一方タンパク質成分は3分以内に溶出することを確認した。また,移動相として0.1%ギ酸含有アセトニトリルを用いたステップグラジェント法により,6種のフェノチアジンを18分以内に溶出させ,さらに相互分離させることが可能となった。さらに,Chromolith Performance RP-18eカラムの使用により,流速を最大4.0mL/minに設定することが可能となり,分析終了後のカラムの洗浄と平衡化を通常の約1/4に時間短縮させることに成功した。MS装置のインターフェイスはSSIを使用した。SSI/MSによるフェノチアジンのマススペクトルでは,プロトン化分子イオンがべースピークとなり,検出限界は血清において,0.02-0.09mg/Lであった。定量性においても,Within-day, Day-to-day等の調査を詳細に行った結果,本システムは法中毒学分野においても応用可能であることが明らかになった。

This year, the conditions for direct injection of serum samples were re-examined for the construction of high speed liquid chromatography (HPLC)/mass spectrometry (MS) systems. This paper introduces the use of Oasis HLB (Waters), Chromolith Performance RP-18e (100x4.6mm i.d) for separation analysis. The injection volume of 400μL is set to be possible. This method is evaluated by adding a sample to the serum. As a result, the target component was determined to be dissolved within 3 minutes of HLB. The mobile phase was dissolved in 0.1% acetic acid, and six kinds of acetic acid were dissolved in less than 18 minutes, and separated from each other. In addition, the Chromolith Performance RP-18e can be used to set the flow rate up to 4.0 mL/min, and the washing and balancing time after the analysis is completed is usually shortened by about 1/4. MS devices are used for SSI. SSI/MS Quantitative,Within-day, Day-to-day investigations were conducted in detail, and the results of this study were analyzed in detail.