TERT導入ストローマ・クローン細胞による効率的な造血幹細胞の体外増幅法の開発

使用TERT引入的基质克隆细胞开发造血干细胞的高效体外扩增方法

• 批准号: 17790457
• 负责人: 河野 豊
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790457/
• 关键词: ヒトストローマ; クローン; 造血幹細胞増幅; hTERT; CD34; ストローマ; 造血幹細胞

昨年までに、TERT遺伝子を導入したヒトストローマ細胞(hTERTストローマ細胞、以下HTS細胞)の親株より、限界希釈法を用いて9クローンのHTS細胞を樹立し、得られたHTS-1からHTS-9の形質を解析した。その結果、すべてのHTSクローンは骨芽細胞の形質を示し、さらにHTS-4からHTS-9まではalpha-smooth muscle actin(ASMA)陽性の筋線維芽細胞の形質を併せ持つことが明らかとなった。さらに造血因子と造血抑制因子の発現を検討したところ、SCF、Wnt-5A、Ang1、N-cadherinは全てのクローンにおいて同等な発現を認めたが、TPO、FL、Il-6、Ihh、Jagged-1、BMP-2、MMP-2、MMP-9、NogginおよびCerberusの発現はクローン間で異なることが明らかとなった。本年度は、さらにHTSクローンの安定性を検討したところ、HTSクローンはHTS親株よりも安定して長期培養が可能であり、増殖速度は一定でcontact inhibitionを認めるなど、2年以上の長期培養後も初代ヒトストローマ細胞とほぼ同様な形質が保たれることが確認された。次に、HTSクローンおよび親株細胞のin vitroにおける造血支持能を、CD34陽性臍帯血細胞5000個と2週間共培養することで解析した。共培養後に得られた総血球数はHTS 9クローン間とHTS親株の間で差を認めなかったが、CD34陽性細胞、CFU-C、CFU-MixおよびHPP-CFC数に関しては、HTS-8において他のHTSクローン・HTS親株に比し高値であった。また、増幅された血液細胞の表面抗原(CD11b、GPA、CD41)をflowcytometry法で検討したが、HTSクローン・HTS親株間で顕著な差を認めなかった。つぎにHTS-8あるいはHTS親株とCD34陽性臍帯血細胞を共培養した後に得られた血液細胞をNOD/SCIDマウスに移植し、6週後のマウスの骨髄中におけるヒト造血細胞の生着率を抗ヒト特異的CD45抗体を用いて解析した。その結果、HTS-8で増幅した造血細胞は、HTS親株で増幅された造血細胞とほぼ同等の生着を示すことが明らかとなった。このことは、hTERT遺伝子で不死化したヒトストローマ細胞は、クローン化しても安定して造血前駆細胞・幹細胞の支持能を保つことを示しており、今後の臨床応用に向けて有望な結果と考えられた。

Last year, we introduced hTERT cells (hTERT cells, HTS cells below) into the parent strain of TERT.より, the limit method is based on the いて9 クローンのHTS cell を establishment, and the られたHTS-1 and からHTS-9のmorphological and qualitative をanalysis した.そのRESULT, すべてのHTSクローンはosseous bud cell のmorphological quality をshowし, さらにHTS-4からHTS-9まではalpha-smooth muscle Actin (ASMA)-positive tendon line fibroblast cells are of the same shape and texture. Hematopoietic factor and hematopoietic inhibitory factor, SCF, Wnt-5A, An g1, N-cadherin is the same as N-cadherin, TPO, FL, Il-6, Ihh, Jagged-1, BMP-2, MMP-2, MMP-9, NogginおよびCerberusの発行はクローン间でdifferentなることが明らかとなった. This year's は, さらにHTS クローンの stability を検したところ, HTS クローンはH The TS parent strain is stable, long-term culture is possible, and the growth rate is certain. Inhibition has been confirmed, and after long-term culture for more than 2 years, the first-generation Tonkin cells have been confirmed with the same morphology and quality. In vitro analysis of HTS parent strain cells and hematopoietic support capacity of 5,000 CD34-positive umbilical cord blood cells was carried out in 2 weeks. After co-culture, the blood cell count and HTS were obtained. 9クローン马とHTS parent strain の间で differenceをcognitionめなかったが, CD34-positive cells, CFU-C, CFU-MixおよびHPP-CFC number is high, HTS-8 is high, HTS is high and HTS parent strain is high. The surface antigens of blood cells (CD11b, GPA, CD41) and the flow cytometry method of HTS and HTS parent strains were determined by flow cytometry.つぎにHTS-8 あるいはHTS parent strain and CD34-positive cord blood cells were co-cultured to obtain られたblood cells をNOD/SCID After 6 weeks of transplantation, the rate of growth of hematopoietic cells in the bone marrow and the specific CD45 antibody against the virus were analyzed using MATCH. The results of the test, HTS-8's hematopoietic cells, and the HTS parent strain's hematopoietic cells are the same.このことは, hTERT remains undead, したヒトストローマcell は, クローン化 しても stabilizes してbefore hematopoiesis The supporting capabilities of stem cells and stem cells are promising and the results are promising for clinical application in the future.

项目成果

Iron/IRP-1-dependent regulation of mRNA expression for transferrin receptor, DMT1 and ferritin during human erythroid differentiation

• DOI: 10.1016/j.exphem.2007.03.005
• 发表时间: 2007-06-01
• 期刊: EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
• 影响因子: 2.6
• 作者: Kato, Junji;Kobune, Masayoshi;Niitsu, Yoshiro
• 通讯作者: Niitsu, Yoshiro

Human mesenchymal stem cells xenografted directly to rat liver differentiated into human hepatocytes without fusion.

人间充质干细胞直接异种移植至大鼠肝脏，无需融合即可分化为人肝细胞。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Blood 106
• 作者: Sato Y;Kato J;Takayama T;Niitsu Y;et al.
• 通讯作者: et al.

Mesenchymal stem cells that produce neurotrophic factors reduce ischemic damage in the rat middle cerebral artery occlusion model

• DOI: 10.1016/j.ymthe.2004.09.020
• 发表时间: 2005-01-01
• 期刊: MOLECULAR THERAPY
• 影响因子: 12.4
• 作者: Kurozumi, K;Nakamura, K;Hamada, H
• 通讯作者: Hamada, H

Ex vivo expansion of G-CSF-mobilized peripheral blood CD133+ progenitor cells on coculture with human stromal cells.

• DOI: 10.1016/j.exphem.2005.10.007
• 发表时间: 2006-02
• 期刊: Experimental hematology
• 影响因子: 2.6
• 作者: Y. Kawano;M. Kobune;Hiroki Chiba;Kiminori Nakamura;R. Takimoto;K. Takada;Yoshinori Ito;J. Kato;H. Hamada;Y. Niitsu

Telomerized human bone marrow-derived cell clones maintain the phenotype of hematopoietic-supporting osteoblastic and myofibroblastic stromal cells after long-term culture

• DOI: 10.1016/j.exphem.2005.09.004
• 发表时间: 2005-12-01
• 期刊: EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
• 影响因子: 2.6
• 作者: Kobune, M;Kato, J;Niitsu, Y
• 通讯作者: Niitsu, Y