胃癌におけるMAPKを介するTGF-βシグナル伝達機構の解析と治療への応用

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1.正常ラット胃上皮細胞(RGM1)への活性型H-RasおよびSmad3リンカー部がリン酸化されない変異遺伝子(Smad3EPSM)導入とTGF-βのシグナル伝達解析RGM1細胞へ活性型H-Ras遺伝子を遺伝子導入(RGMRas細胞)したところ、細胞の形質転換、TGF-βによる細胞増殖抑制が阻害され、Smad3のリンカー部は恒常的にリン酸化が亢進し、細胞内のSmad2,3のリンカー部(Smad2/3L)がリン酸化したものは核内に局在していることが、我々の作成した部位特異的抗リン酸化Smad2または3抗体により分かり、核移行したpSmad2/3Lは、PAI-1やMMP1,2,9の発現を誘導し、細胞浸潤能を高めていた。TGF-βで親株RGM-1細胞を刺激すると、Smad3C末部(Smad3C)がリン酸化され、細胞増殖が抑制されたのに対し、RGMRas細胞ではTGF-βで刺激してもSmad3Cはリン酸化されず、細胞増殖は抑制されなかった。さらに、RGM1細胞へSmad3EPSM遺伝子を導入したところ、内在性Smad2/3Lリン酸化および細胞浸潤能が著しく阻害され、RGMRas細胞で一旦認められなくなっていたTGF-β依存性のSmad3Cリン酸化およびpSmad3Cを介する細胞増殖抑制は、親株RGM-1細胞と同等に認められるようになった。Smad2/3LならびにSmad3Cリン酸化は癌の進展を促進する癌化シグナルであることがわかった。2.ヒト胃癌組織におけるTGF-βのシグナル伝達解析本学倫理委員会の承諾を得、インフォームドコンセントの上、手術により得られたヒト胃癌組織を免疫組織化学染色にて解析した。正常組織に比べSmad3のリンカー部のリン酸化は核内に局在し恒常的に亢進しており、Smad2のC末部のリン酸化は細胞質内にて亢進されSmad3Cのリン酸化は現弱傾向を認めた。