肝内免疫プロテアソームプロファイル変化の解析による自己免疫性肝炎再燃機序の検討

通过分析肝内免疫蛋白酶体谱变化检查自身免疫性肝炎发作机制

• 批准号: 17790469
• 负责人: 安部 宏
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790469/
• 关键词: AIH; 免疫プロテアソーム; 自己抗原; 抗原提示; 自己免疫性肝炎; 動物モデル

まず、20Sプロテアソームを精製方法の確立を行った。マウスAIHモデルの融合細胞投与前、肝炎誘導時、肝炎収束時、IL-12投与による肝炎再燃時にそれぞれ肝臓を採取し、採取後すぐの肝臓をホモジナイズしフィルター処理後の上清をDEAEセファセルに供し、得られたプロテアソームを含むタンパク分画をショ糖密度勾配遠心に供し、プロテアソーム分画をMonoQカラムにより精製を試みプロテアソーム分画が得られることが明らかとなった。この方法を用いて得られたプロテアソーム分画を二次元電気泳動により展開し、得られた各スポットを切出しトリプシン処理後にMALDI-MS解析を行ないプロテアソームのサブユニットプロファイルを解析する技術の開発、この方法によるAIHの発症、再燃時の肝内免疫プロテアソームのサブユニットプロファイルの比較を試みた。AIHの発症時、再燃時のプロテアソーム分画の二次元電気泳動パターンは、ほとんど同一であったが、発症時にみられ再燃時にはみられないスポットが2個、逆に発症時にみられないが再燃時にはみられるスポットが1個認められた。この計3個のスポットのMALDI-MS解析によるプロテアソームのサブユニットプロファイル解析を試みたが、今回試みたプロテインチップ解析方法では、3個のスポット間での差異は認めなかった。以上より、AIHの発症時、再燃時には、肝内で発現する免疫プロテアソームサブユニットプロファイルがわずかに異なっており、発症時と再燃時では提示される自己抗原の性状が変化し、それにより再燃が生じる可能性が示唆された。

The establishment of a refined method for the production of Before administration of fusion cells, during hepatitis induction, during hepatitis induction, during IL-12 administration, during hepatitis reignition, during liver sample collection, after liver sample collection, after supernatant treatment, after DEAE treatment, after treatment, after The best way to get a job is to make sure you're ready. This method is used to develop and compare MALDI-MS analysis techniques for the detection of AIH and the detection of intrahepatic immune response during reignition after the analysis of MALDI-MS analysis techniques for the detection of AIH and the detection of intrahepatic immune response during reignition. AIH's development time, reburning time. The MALDI-MS analysis of three different types of samples was carried out in a trial manner, and the analysis method of three different types of samples was carried out again. The above, AIH development, reburning, liver development, immune response, immune response, liver response, development and reburning, the characteristics of the antigen change, reburning, the possibility of reburning is indicated.