FALS及びモデル動物における遺伝子発現の網羅的解析

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1.Micro ArrayAceGene社のDNAtip30Kを用い、Microarrayを行った。変異SOD1(126TTdel)遺伝子を導入したALSモデルの発症後マウス脊髄および同日齢の正常マウス脊髄からRNAを抽出し、Cy3/Cy5およびCy5/Cy3でラベルし競合的アレイを行い、解析対象とした。2以上の高発現、0.5以下の低発現を有意とし、4ペアで同様の発現パターンを認める分子を検索した。また、同時に発症前98日齢のマウスも同様にmicroarrayを行った。結果、発症後では高発現パターン54分子、低発現パターン4分子がピックアップされた。このうち、発現量、神経系との関連性などを考慮し、10分子を選択し、Real Time PCRの解析対象とした。2.Real Time PCRMicro arrayで解析対象とした10分子でReal Time PCRを行った。結果、HSP、Cathepsinなど6分子で同様のパターンを得ることが出来、有意な変化であることを確認した。3.免疫染色による蛋白発現解析2.で得られた結果のうち解析可能な4分子(HSP27、CathepsinH(Ctsh)、Paip1、μ-crystallin(Crym))のマウス腰髄の免疫染色を行った。4分子すべて病期進行に伴い発現が認められ、特にPaip1は発症前からの発現が認められ、病態に対する深い関与が推察された。いずれの分子もグリア細胞に発現しており、HSP27、Ctshは反応性アストロサイト、Crym、Ctsh、Paip1はミクログリアに発現していた。いずれも細胞保護的に発現している可能性が考えられ、今後の治療戦略に対して参考となる結果であった。