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甲状腺ホルモン受容体AF-2領域変異体ノックインマウスの作製と解析

甲状腺激素受体AF-2区域突变敲入小鼠的产生与分析

基本信息

批准号：
17790622
负责人：
渋沢信行
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

甲状腺ホルモンは生体において多くの組織、臓器の発達や恒常性の維持において重要である。その作用は核受容体スーパーファミリーの一つである甲状腺ホルモン受容体(TR)を介して行われている。TR-βの転写調節機構において転写共役因子、コアクチベーターとコリプレッサーの重要性は既知の事実であるが生体内での詳しい動態、メカニズムについては未だ不明な点が多かった。そこで我々はTR-βのリガンド結合領域AF-2領域に変異を持ち、リガンド結合とコリプレッサーの結合には影響ないが、コアクチベーター(CoA)との結合が障害されたE457A変異体に注目し、その解析を行うことにした。TR-β遺伝子にE457A変異を組み込んだターゲティングベクターを作製し、ES細胞における相同遺伝子組み換え法を用いてノックインマウスを作製した。ターゲティングベクターにはACNカセットが導入されている。キメラマウス作製を経て、C57/BL6との交配を行い、TR-β遺伝子にGS125変異を有したヘテロ接合体、ホモ接合体を作製した。得られた変異マウスの成長、体格、体重、妊娠、出産、授乳などを観察し、野生型マウスと比較したところ明らかな差は認められなかった。甲状腺ホルモンが関わる重要な生命活動のうち、特に視床下部-下垂体-甲状腺の負のフィードバック機構におけるTR-βと転写共役因子群との関わりについて、血中甲状腺ホルモン、甲状腺刺激ホルモン(TSH)値をラジオイムノアッセイにて測定し、甲状腺ホルモン不応症の存在が明らかとなった。またノーザンプロット解析によりTSHのmRNA発現レベルにおいて甲状腺の負のフィードバック機構は破綻していた。末梢組織での甲状腺ホルモンの影響を見るため、肝臓でのGsta、5'-deiodinase type1のmRNA発現レベルを比較するとE457A TR-βノックインマウスではそれぞれ甲状腺ホルモンによる負の調節、正の調節が障害されていた。

Thyroid gland is important for the development and maintenance of multiple tissues and organs in the organism. The role of the thyroid receptor (TR) in the development of nuclear receptors TR-β is the key to the regulation mechanism, including the common service factor, the importance of the common service factor, and the importance of the common service factor. The TR-β and the combination domain AF-2 are different from each other in terms of influence, influence, and analysis. TR-β gene E457A gene mutation control, ES cell mutation control The first step is to open the door to the world. C57/BL6, TR-β, and GS125 are different. Growth, physique, weight, pregnancy, birth, lactation, and wild-type differences Thyroid gland is important for vital activities, especially for lower part of the optic bed-hypophysis-thyroid gland negative organ, TR-β, co-working factor group, blood thyroid gland, thyroid stimulation (TSH) value, thyroid gland disease. The expression of TSH mRNA was detected in the thyroid gland and the thyroid gland was found to be defective. Compared with E457A TR-β mRNA expression in Gsta and 5'-deiodinase type1 mRNA in peripheral tissues, the effects of Gsta and 5'-deiodinase type 1 mRNA expression in liver tissues were negatively regulated and positively regulated.