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ErbB受容体を介した成熟心筋細胞の増殖活性制御の分子機構

ErbB受体介导控制成熟心肌细胞生长活性的分子机制

基本信息

批准号：
16H07353
负责人：
平井希俊
金额：
$ 1.75万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-08-26 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

マウスの心筋細胞でErbB2を強発現させることにより、心筋細胞の脱分化・増殖を誘導し、心機能を回復させることを試みている。その目的のためにRosa遺伝子座でCMVプロモーターの下流にErbB2を発現誘導できるノックインマウスを作製している。まず、コンディショナルにErbB2を発現誘導するターゲティングベクターのデザインを当初のデザインを改変した。すなわち、1 )ErbB2を目的の細胞で安定して強発現できるように Rosa遺伝子座の転写開始点を除いた上でCMVプロモーターを配置し、2) 心筋細胞で癌遺伝子であるErbB2を強発現させたままにしておくと病的な心筋細胞になってしまうため、プロゲステロンアナログでtransgeneを除けるようにあらたにroxP配列をErbB2 cDNAの両端に配した。また、3) mCherryをヒストン融合とすることにより核をラベルし、ErbB2を強発現している細胞をよりトラッキングしやすくした。次に、この改変ベクターを用いてES細胞のRosa遺伝子座への相同組換えを行った。Crispr/Cas9を用いることにより適切に相同組換えを起こしたES細胞のクローンをいくつか得ることに成功した。現在、これらのESクローンを8細胞期胚にインジェクションし、偽妊娠マウスの子宮に移植を終えたところである。また、roxP配列ではさまれたErbB2 cDNAを除去するための変異プロゲステロン受容体融合Dreリコンビナーゼを全身で発現するノックインマウスも作製中であり、すでに相同組換えを起こしたES細胞のクローンを得ている。

ErbB2 is strongly expressed in cardiac muscle cells, induced by dedifferentiation and proliferation of cardiac muscle cells, and restored to cardiac function. The purpose of the Rosa virus is to induce the development of ErbB2 in the downstream of CMV. ErbB2 is the first time that the virus has been detected. 1 ) ErbB2 gene expression in target cells is stable, 2) ErbB2 gene expression in cardiac muscle cells is strong, 3) ErbB2 gene expression in target cells is strong, 3) ErbB2 gene expression in cardiac muscle cells is strong, 4) ErbB2 gene expression in target cells is strong, 5) ErbB2 gene expression in target cells is strong, 6) ErbB2 gene expression in target cells is strong, 7) ErbB2 gene expression in target cells is strong, 8) ErbB2 gene expression in target cells is strong, 9) ErbB2 gene expression in target cells is strong, 9) ErbB2 gene expression in target cells is strong, 9) ErbB2 gene expression in target cells is strong, 9) ErbB2 gene expression in target cells is strong. 3) mCherry is a fusion of nuclear and ErbB2 molecules. The same composition of Rosa gene loci of ES cells was used in this study. Crispr/Cas9 is used in the same way. Now, this is the end of the 8-cell embryo phase, the false pregnancy phase, and the uterus transplant phase. ErbB2 cDNA was removed from the genome of the human ES cell and the same sequence was generated in the genome of the human ES cell.