肝細胞特異的高脂血症惹起物質ANGPTL3の発現調節とインスリン作用への影響

肝细胞特异性高脂血症诱导物质ANGPTL3表达调控及其对胰岛素作用的影响

• 批准号: 17790630
• 负责人: 渡邉 昌樹
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790630/
• 关键词: ANGPTL3; インスリンシグナル; FAO細胞

1)インスリン作用の減弱がANGPTL3の発現にどのように影響を与えるかどうかにつき、FAO細胞(ラット肝細胞癌由来の継代細胞)とマウス肝臓の初代培養、これら2種類の細胞に対して、インスリンを24時間投与し、ANGPTL3の発現量をノザンブロット法にて検討したところ、FAO細胞において約43%の発現の減少、マウス肝臓の初代培養においては、約70%ものANGPTL3の発現低下が見られ、さらにこれらの効果は、wortmanninによって阻害された。以上からインスリンによるPI3Kカスケードの活性化がANGPTL3の発現量を負に制御していることがわかった。2)ANGPTL3の脂肪細胞に対する作用を検討するため、アデノウイルスを用いて3T3-L1細胞に発現させてみたが、インスリン作用には全く影響を与えないため、COS細胞に発現させた上清からのANGPTL3の蛋白精製法を試みた。EGPコンポを用いた濃度勾配法によって、数種類のクロマトグラフィーを組み合わせる(ゲルろ過、Qカラム、疎水性など)ことにより、ANGPTL3の精製を試みており、現在までのところ、数mgまでの蛋白を精製するまで至っており、今後、スケールを大きくすることにより、純度の高いANGPTL3の精製法の確立を目標としている。

1) イ ン ス リ ン effect weakened の が ANGPTL3 の 発 now に ど の よ う に influence を and え る か ど う か に つ き, FAO cells (ラ ッ ト hepatocellular carcinoma (HCC) origin の 継 generation cells) と マ ウ ス routine liver の original culture, こ れ ら 2 kinds の cell に し seaborne て, イ ン ス リ ン を 24 time and し ANGPTL3 の 発 now quantity を ノ ザ ン ブ Beg し ロ ッ ト method に て 検 た と こ ろ, FAO cell に お い て about 43% の 発 is の reduce, マ ウ ス routine liver の original culture に お い て は, about 70% も の ANGPTL3 の 発 now low が see ら れ, さ ら に こ れ ら の unseen fruit は, wortmannin に よ っ て resistance against さ れ た. Above か ら イ ン ス リ ン に よ る PI3K カ ス ケ ー ド の activeness が ANGPTL3 の 発 now quantity を negative に suppression し て い る こ と が わ か っ た. 2) ANGPTL3 の fat cells に す seaborne る role を beg す 検 る た め, ア デ ノ ウ イ ル ス を with い て 3 t3 cells - L1 に 発 now さ せ て み た が, イ ン ス リ ン role に は く influence を and all え な い た め, COS cell に 発 now さ せ た supernatant か ら の ANGPTL3 の protein refined method を try み た. Hook taking コ ン ポ を with い た concentration distribution law に よ っ て, several kinds の ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を group み close わ せ る (ゲ ル ろ, Q カ ラ ム, water-based 疎 な ど) こ と に よ り, ANGPTL3 の refined を try み て お り, now ま で の と こ ろ, mg ま で の protein を refined す る ま で to っ て お り, in the future, ス ケ ー ル を き Youdaoplaceholder0 る とによ とによ とによ, high-purity <s:1> ANGPTL3 <s:1> refining method <e:1> establishes を target と <s:1> て る る る.