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異種移植における糖鎖抗原とNK細胞

异种移植中的碳水化合物抗原和 NK 细胞

基本信息

批准号：
17790889
负责人：
高叢笑
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

<NKレセプターの解析>siRNA配列の導入や糖鎖プローブ,レクチン(GSIB4)及び抗体などを用いてブタ内皮細胞(SEC)表面の糖鎖をブロックし、NK依存性細胞傷害性の変化にα-Galエピトープが関与する事を証明した。ブタの血管内皮細胞からα-Galエピトープ関連糖ペプチドを調製し、糖鎖アフィニディカラムを作成した。対照としてα1,3GTノックアウトブタの内皮細胞からも同様に糖ペプチドを調製した。ヒトNK細胞から膜タンパク質画分を分離し、糖鎖アフィニティカラムを用いたクロマトグラフィを行った。表面プラズモン法を用いて、α-Galエピトープアフィニディカラムの溶出画分に糖鎖を認識するリガンドが含まれていることを確認した。SDS-PAGE電気泳動の結果から、45kDa付近にあるタンパク質はα-Galエピトープに親和性があることを見出した。タンパク質のN末アミノ酸シークエンス分析やLC/MS質量分析などによって、いくつかのペプチド配列が得られた。Gene bankから相同性があるものを見つかっていないため、新規のNKレセプターであることが明らかにした。<新生児ブタの膵臓isletの異種抗原についての解析>I型糖尿病の治療法としてブタ膵島細胞移植法が注目されている。我々は新生児ブタの膵臓isletの糖鎖抗原を解析した。新生児ブタのNPCC(neonatal porcine islet-like cell clusters)上ではα-Galエピトープが発現しており、ヒト自然抗体、IgGとIgMの沈着が見られた。Tunicamycin処理によって、IgG沈着が著しく減少したことから、N型糖鎖がNPCCの異種抗原性に深く関与していることを明らかにした。α-Galエピトープのみならず、Hanganutziu-Deicher(H-D)抗原の存在も抗体反応によって確認された。NPCCのsialidase処理の結果から未知のシアル酸抗原の存在が示唆された。

<Analysis of NK cell profile> The introduction of siRNA sequences, including glycophosphorin (GSIB4) and antibodies, was demonstrated to be associated with glycophosphorin on endothelial cells (SEC) and the transformation of NK-dependent cellular toxicity. The vascular endothelial cells of the blood vessel were prepared by α-Gal-2-deoxyglucose modulation and glucose chain reaction. In response to α1,3GT, the endothelial cells in the liver were modulated by glucose. The NK cells were isolated from the plasma, and the glycans were isolated from the plasma. The method of surface degradation was used to confirm the presence of α-Gal. SDS-PAGE Electrophoresis Results: 45kDa affinity Quality analysis and LC/MS quality analysis are available in the following ways: Gene bank identity <Analysis of Heteroantigen in Newborn Infants> Treatment of Type I Diabetes and Cell Transplantation in Newborn Infants The analysis of glycan antigens in the newly born islets Neonatal porcine islet-like cell clusters (NPCC) contain α-Gal, natural antibodies and IgM. Tunicamycin treatment reduces IgG deposition and N-type glycogen binding to NPCC heteroantigenicity. The presence of α-Gal, Hanganutziu-Deicher(H-D) antigen and the presence of anti-Gal antibodies were confirmed. The results of sialidase treatment of NPCC indicate the presence of unknown serine antigens.