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同所性移植モデルにおける胆嚢癌の転移・進展機序解析とその臨床応用

胆囊癌原位移植模型转移进展机制分析及临床应用

基本信息

批准号：
17790923
负责人：
木村康利
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790923/
关键词：
胆嚢癌肝転移リンパ節転移腹膜播種同所性移植高転移株

项目摘要

1.胆嚢癌の肝転移、リンパ節転移、腹膜播種に関し、それらの生物学的機序の解明を目的とし、胆嚢癌同所性移植モデルを用いた実験・研究を企画立案した。(1)肝・リンパ節転移、腹膜播種の三つの転移・進展形式を個別に有する選択的転移株を樹立する。(2)得られた選択的転移株を用いin-vitro、in-vivo(xenograft)での細胞・分子生物学的解析を行う。(3)既知または新規分子標的に対し転移阻止実験を行い、胆嚢癌の転移・進展に関する新規分子標的治療法を確立する。以上が本研究の主要な目的である。2.本年度の研究実績(1)胆嚢癌細胞株NOZを用いたヌードマウス同所性移植モデルの追試Horiuchiらの確立した胆嚢癌細胞株NOZ同所性移植モデルを追試した。このモデルの再現性をわれわれの研究室において検討したが、安定した同所性移植モデルは再現不能であった。この間にgreen fluorescent protein(GFP)遺伝子発現ベクター(pCDNA-GFP)を、NOZをはじめとする胆嚢癌細胞株に安定的に導入し、蛍光標識された癌細胞株をin-vitroで作成した。これらの細胞株を細胞生物学的に解析したが、pCDNA-GFP導入NOZ株と、親株であるNOZに増殖能、コロニー形成能など有意な差を認めなかった。(2)各種選択的転移株の解析;教室においてこれまで行ってきた各種選択的転移株の作成方法に準じ、NOZを脾内注入し、肝、リンパ節転移巣、腹膜播種巣より初代培養化し再度同所生移植を繰り返すことで、各種高転移株を作成した。他の細胞株(膵癌、胃癌、大腸癌)においても併行し同様の高転移性株を樹立した。(3)担癌マウスの移植腫瘍巣と各種転移巣腫瘍組織の解析;最終的に得られた、高い選択性を有する各種癌細胞の移植巣と、肝、リンパ節転移巣、腹膜播種巣を凍結標本として保存し、cDNAマイクロアレイによる遺伝子発現解析を行った。得られた膵癌高肝転移株ではosteopontinが極めて高発現しており、in-vivoの発現抑制実験において肝転移が低下することを明らかにした(Ohno K, submitting)。(4)研究途上で、同様の実験系が新たに発表された(Egberts JH, et al. Clin Exp Metastasis.2007)。本研究に資する可能性があり、これらの系を用いた更なる研究を現在計画中である。

1. The study of liver metastasis, metastasis, peritoneal seeding, and biological mechanisms of biliary cancer is planned. (1)There are three types of migration: liver migration and peritoneal seeding. (2)Cell and molecular biology analysis of selected plants using in-vitro, in-vivo(xenograft). (3)New molecular targets are known to be relevant to the prevention of cancer progression and the establishment of new molecular targets for treatment The above is the main purpose of this study. 2. Results of this year's study (1) Establishment of the Horiuchi study on the use of the NOZ cell line for homologous transplantation The reproducibility of this kind of equipment can not be reproduced in the laboratory. In the meantime, green fluorescent protein(GFP) gene expression vector (pCDNA-GFP) and NOZ gene expression vector were stably introduced into biliary cancer cell lines, and fluorescent markers were in-vitro prepared for cancer cell lines. Cell biology analysis of these cell lines, pCDNA-GFP introduced into NOZ strain, parent strain, NOZ proliferation ability, and gene formation ability. (2)Analysis of various selected plants; preparation of various selected plants; injection of NOZ into spleen, liver, liver, peritoneal seeding; preparation of primary culture; and re-transplantation. Other cell lines (cancer, gastric cancer, colorectal cancer) are also highly migratory. (3)The analysis of tumor tissue and metastasis; the analysis of gene expression of tumor cells in liver, liver, lymph node and peritoneum; (Ohno K, submitting). (4)A new approach to the study was developed (Egberts JH, et al. Clin Exp Metastasis. 2007). The possibility of this study is discussed in detail below.