頭頚部癌におけるコネキシンの発現の検討と臨床応用に関する研究

头颈癌中连接蛋白的表达及临床应用研究

• 批准号: 17791213
• 负责人: 小澤 宏之
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: 独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791213/
• 关键词: 頭頸部癌; コネキシン; 免疫染色; 細胞増殖; 細胞培養

コネキシン(Cx)はギャップジャンクション蛋白であり、いままでに20種類のファミリー蛋白が確認され、生体内の組織ごとに発現しているCxの種類が異なる。近年は様々な腫瘍細胞へCx遺伝子を導入することで増殖が抑制されることが報告されている。今回我々は、頭頸部癌組織のCx26およびCx30の発現について免疫染色法で検討を行った。癌周囲の正常粘膜ではCx26は粘膜の全層で発現が認められた。Cx30は基底層では殆んど発現がなく有棘層に強い発現を認めた。癌組織と正常粘膜とを比較すると、Cx26では発現量の差は認めなかったが、Cx30では癌組織でのCx30の発現が低下していた。癌細胞内のコネキシンの分布は、Cx26では細胞質に発現した。Cx30は細胞膜に発現する傾向があったが、特に舌癌ではCx30を細胞質に強く発現する細胞が散在していた。続いて免疫染色の結果をふまえてCx30を強制発現するプラスミドベクター(Full)を作成した。細胞内での局在を判定するためGFP蛋白を共発現するように構築した。コントロールベクターとしてGFPのみ発現するベクター(EM)、Cx30 deletion of C-terminal(DelC),Cx30 C-terminal(CT)を発現するベクターを作成した。各々のプラスミドベクターを頭頸部癌細胞株であるHSC-4に遺伝子導入し、強制発現された蛋白の局在を検討した。EMを導入した細胞株では核が凝縮し細胞全体に強く発現したが、Fullでは主に細胞膜に局在し、DelCでは核周囲〜細胞質に発現した。CTでは細胞質に淡く発現する細胞と核凝縮を伴い細胞全体に強く発現する細胞が混在した。増殖率については細胞周期関連蛋白であるKi-67(MIB-1)との二重染色を行いMIB-1 indexで評価したところEMと比較しFullおよびDelCで増殖能が亢進する傾向があった。

The Cx protein was identified in 20 different species and found in different tissues. In recent years, the introduction of Cx gene into tumor cells has been reported. In this paper, the development of Cx26 and Cx30 in head and neck cancer tissues was studied by immunostaining. The normal mucosa around the cancer is Cx26, and the whole mucosa is recognized. Cx30 is a basement layer, and the basement layer is a strong layer. Compared with normal mucosa, Cx26 and Cx30 in cancer tissue were lower. The distribution of protein in cancer cells is different, Cx26 is different from cytoplasm. Cx30 has a tendency to develop in the cytoplasm, especially in tongue cancer. The results of immunostaining were obtained by using Cx30 as a stress indicator. The expression of GFP protein in cells is determined by the structure of GFP protein. The deletion of GFP (EM), Cx30 deletion of C-terminal(DelC),Cx30 deletion of C-terminal(CT) is completed. The expression of protein in HSC-4 cells was investigated under stress. EM is introduced into the cell line, the nucleus condenses, the whole cell is strongly developed, the main cell membrane is developed, and the nucleus is developed into the cytoplasm. CT cells are mixed with cytoplasm, nucleus and whole cells. Cell cycle related protein Ki-67(MIB-1) and double staining were found in the growth rate, and the growth rate was increased by comparing MIB-1 index with Full DelC index.