Cancer progression-related translocation of gap junction protein into the Golgi apparatus – Elucidation of its molecular mechanism

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令和４年度は、以下の点について研究を進めた。Rab5やRab9のGEFやGAPの発現量とCxの局在の関連を探った・・・Rab5はコネキシン(Cx)をはじめとする膜タンパクのエンドサイトーシスに関与しており、Rab9はエンドソームからトランスゴルジネットワークへの逆行輸送に関与しているが、これらのRabファミリータンパクの機能変化は、発現量ではなく活性の変化によるものである。そこで、これらのRabタンパクを活性化するGEF (guanine-nucleotide exchange factor)や不活化するGAP (GTPase-activating protein)の発現量を、様々な細胞を用いてウェスタンブロットで検討した。材料としては、肝細胞癌や頭頸部扁平上皮癌、乳癌、皮膚扁平上皮癌などの腫瘍由来でCxが細胞膜に局在する細胞やゴルジ体に局在する細胞など、局在の異なるCxを発現している細胞シリーズを用いることとした。Rab5、Rab9とも複数のGEFやGAPが存在するので、これら制御タンパクの発現量とCxの細胞内局在および局在量を対比させたところ、Cxが膜に局在する細胞では、Rab5の主たるGAPであるRabGAP-5の発現が高い傾向があり、Cxが主にゴルジ体に局在する細胞では、Rab5のGEFであるRin3とRab9のGEFであるDENND2が有意に増加していることが確認された。