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口腔扁平上皮癌における細胞分裂制御遺伝子の発現解析

口腔鳞状细胞癌细胞分裂控制基因的表达分析

基本信息

批准号：
17791311
负责人：
山本剛
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

H17年度までの結果から、RAD21分解産物のうち、80KDのものが口腔粘膜上皮において分化と関連する可能性があることが示唆された。そこで本年度はまず口腔扁平上皮癌培養細胞株に様々な分化誘導作用があるとされている試薬を添加し分解産物の産生を検索した。その結果、トリコスタチンAや5アザサイチヂン、レチノイン酸などにおいても同様の分解産物が検出された。さらに口腔粘膜上皮の分化と関連しているといわれるカルパインの影響を考え、分化誘導試薬とカルパインインヒビターを併用した検索を行った。細胞分画を行い、核と細胞質におけるRAD21分解産物の発現を検討した結果、分化誘導試薬とカルパインインヒビターを共に添加した細胞で、RAD21の80KD分解産物が細胞質において減少しているという結果を得た。この結果によりRAD21はカルパインによって分解され、その80KD分解産物は核から細胞質へと移行して細胞分化に関連している可能性が示唆された。並行して症例数を増やしたレーザーマイクロダイセクション法とウエスタンブロット法を用いた検索にいても分化との関連をさらに裏付ける結果となった。現在はカルパインによっていかなるポイントで分解されるかについて質量解析によって検索を試みているが、検索が難しく、ポイントミューテーションを用いた検索方法に変更するかについて検討中である。今回の研究では主にレーザーマイクロダイセクション法からのウエスタンブロット法を実現する為に、検出感度についての検討を多く行ったが本年度はさらに応用としてその手法を微量検体ではなく微量に発現しているタンパク質の検出に用いることを試みた。その結果、FRNKタンパク質を培養細胞から検出することに成功し、FRNKの機能解析にこの手法が大きく役立った。

The results of H17 showed that there was a possibility that the decomposition products of RAD21 and 80KD could be related to the differentiation of oral mucosa epithelium. This year, we have been trying to increase the production of decomposition products in oral squamous cell carcinoma cell lines. As A result, the decomposition products of the same kind were detected. In addition, the differentiation of oral mucosa epithelium is related to the differentiation of oral mucosa. Cell analysis, nuclear and cytoplasmic analysis of RAD21 decomposition products development results, differentiation induction assay, cell differentiation, 80KD decomposition products, cytoplasmic reduction results These results suggest that RAD21 may be involved in cytokinesis and cell differentiation. The number of parallel cases increased, and the number of parallel cases increased. Now, the quality analysis method is used to analyze the quality of the products. This year's study is aimed at exploring ways to improve the quality of products. The results showed that FRNK was successfully cultured and its function was analyzed.