唾液腺癌におけるmaspinの発現と役割について

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Maspinはもともと乳腺の上皮細胞で多く発現し、血管新生を抑制することで癌抑制遺伝子として働くことが報告された、約42-kDaのserine protease inhibitorである。現在では乳ガンだけでなく、前立腺ガンや大腸ガン、口腔扁平上皮ガンなど様々な部位のガンに強く関与し、増殖や浸潤、転移だけでなく、予後にも影響すると言われている。今回の研究では、まずmaspinの発現についてwestern blot法によりタンパク量を解析した。このとき交代はrabbit-polyclonal抗体を用い、コントロールにはα-tubulinを使用した。その結果、唾液腺癌の細胞系であるHSG (human salivary gland tumor cell line)細胞では、対照群のHSC (human oral squamous cell carcinoma cell line)-2,3,4細胞に比べ、maspinが多く発現していた。このことは、maspinに特異的なプライマーを作製することで、RNAレベルでも同様であることを、RT-PCRにて確認した。続いて某社のRNAi Kitのプロトコールに従い、maspinに対するsiRNAをデザイン・合成して、maspinノックダウン細胞を上記に示した細胞群で作製した。その結果、HSG細胞についてはほぼ良好なノックダウン効果がタンパク質レベルでみられたが、HSC細胞ではトランスフェクション効率が悪く、タンパク質レベルでのノックダウンは当初見られなかった。しかし、siRNAのデザインやトランスフェクションの条件を変更することによって、ノックダウン効率は徐々に上昇している。また、刺激としてタモキシフェンを使用している。現在タモキシフェン依存性のアポトーシスはtrypan blue assayにより細胞間の有意差は認められず、maspinのupregulationなどの変化も見られない。以上より、口腔扁平上皮ガンと比較して、唾液腺ガン特異的な抗ガン剤依存性の反応は、見られないという結果になった。