遺伝子診断法を用いた担癌動物血液中からの癌細胞の検出と口腔癌患者への臨床応用

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【目的】この研究ではヒト固有遺伝子であるヒトβグロビン遺伝子を用いて、ヒト口腔扁平上皮癌細胞株HSC-3をヌードマウス背部皮下に移植し、血液中からの遊離癌細胞、リンパ節、肺からの微小転移を検出すること、またHSC-3細胞株は同時に癌抑制遺伝子であるp53遺伝子に変異を有しているため、遺伝子変異部位を特異的に増幅可能なオリジナルプライマーを作製し、変異した微量癌細胞を検出することを目的とした。【方法】4週齢のヌードマウス背部皮下にHSC-3細胞を約10^6に調整した細胞を移植し、正着を確認した後、4週、8週、12週において、所属リンパ節、肺を摘出し通法に従いDNAを抽出し、nested PCR法、Mutant allele-specific amplification(MASA)法を用いて転移の有無を確認した。【結果】HSC-3の移植生着率は4週、8週、12週で19/20(95.0%)、18/20(90.0%)、18/20(90.0%)であり、βグロビン遺伝子を用いた転移検出率では4週、8週、12週ではリンパ節では0/20(0.0%)、8/20(40.0%)、9/20(45.0%)であり、肺には0/20(0.0%)、6/20(30.0%)、8/20(40.0%)の転移を認めた。またHSC-3は癌抑制遺伝子であるp53に遺伝子変異を持つため、特異的に変異遺伝子を増幅することが可能なオリジナルプライマーを作成しMutant allele-specific amplification(MASA)法を用いて転移検出率を検出した結果、同様に4週、8週、12週では、リンパ節への転移は0/20(0.0%)、8/20(20.0%)、9/20(45.0%)であり、肺への転移は0/20(0.0%)、4/20(20.0%)、6/20(30.0%)であった。この結果より、HSC-3に特異的なプライマーの作製、及びMASA法を用いた検出は可能であり、p53遺伝子変異を有する口腔癌患者において、臨床応用が可能であると考えられた。