权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

歯周病関連細菌由来ストレス蛋白質による樹状細胞および抗原特異的T細胞の解析

使用源自牙周病相关细菌的应激蛋白分析树突状细胞和抗原特异性 T 细胞

基本信息

批准号：
17791568
负责人：
田中繁寿
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Aichi Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791568/
关键词：
HSP70 Actinobacillus Actinomycetemcomitans

项目摘要

申請者は昨年までの報告で目的タンパク質であるActinobacillus Actinomycetemcomitans由来DnaKの遺伝子を大腸菌コンピテントセルに導入したところまで報告した。1.その後、IPTGによる目的タンパク質の発現を確認するために何度かSDS-PAGEを行ったが、目的とする70kDa付近にタンパク質の発現を認めなかった。2.そのため、当初の計画にはなかったが導入した遺伝子が正しいものであるかを確認するためインサートプライマーを設計し、シークエンスにて塩基配列を確認した。結果、全配列を確認したわけではないが、開始コドンより1Kbase程度にわたり、目的の遺伝子の塩基配列は正しく組み込まれていることを確認した。3.その後、同施設の研究者の方々に相談し、IPTGによる目的タンパク質の誘導の段階において、なにかしらのエラーがあると考え、タンパク質発現の条件を変える(具体的には、試薬をもう一度チェックした後、タイムコース、IPTGの濃度変更)など何度か試してみたののタンパク質の発現がうまく認められなかった。ウエスタンブロットにより目的タンパク質の確認はできたが、タンパク質の精製の目的のためには発現量が少ないと考えた。以上より、シークエンスの結果から導入した遺伝子は目的タンパク質のものであることは確認したため、タンパク質合成の段階で、発現の誘導がうまく行えていないと考え同施設の研究者の方々に相談し、実験中である。具体的にはタンパク質回収の効率をあげることや発現ベクターをもう一度考え直すことなどを計画し、タンパク質精製が可能な程度の発現を目的に実験を継続している。

The applicant reported yesterday that Actinobacillus Actinomycetemcomitans were introduced into the study. 1. After IPTG, SDS-PAGE was performed to confirm the protein expression of the target protein. 2. The original plan is to confirm the basic layout of the project. Result: All the columns are confirmed. Start the column at 1Kbase level. Target column is confirmed. 3. After the investigation, the researchers in the same institute discussed the method, IPTG, the purpose of the study, the stage of induction of the quality, the degree of induction, the degree of induction. The quality of the product is determined by the quantity of the product. The results of the above research are discussed with the researchers who conducted the research. The specific quality recovery efficiency of the project, the quality improvement of the project, the possibility of the project, and the development of the project.