Analysis of the IL4-receptor signal transduction in vivo by retroviral gene transfer of IL4-receptor mutants into hemopoietic stem cells of IL4-receptor deficient mice

通过将 IL4 受体突变体逆转录病毒基因转移到 IL4 受体缺陷小鼠的造血干细胞中来分析体内 IL4 受体信号转导

• 批准号: 5349416
• 负责人: Professor Dr. André Gessner, Ph.D.
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Mikrobiologie und Hygiene
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2001-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5349416?language=en
• 关键词: Analysis; IL4; receptor; signal; transduction

Während der letzten Jahre konnte unsere Arbeitsgruppe neue intrazelluläre Domänen des Interleukin-4 Rezeptors (IL-4R) der Maus charakterisieren, die für die Vermittlung von Zellproliferationssignalen essentiell sind. Durch Pepscan-Analysen, Yeast-Two-Hybrid-Klonierung und Coimmunpräzipitationen wurden drei bislang nicht beschriebene IL-4R-Signaltransduktionsmoleküle definiert, die mit den entsprechenden Domänen interagieren. Ziel des geplanten Projektes ist es, die Relevanz der IL-4R-Domänen und Signaltransduktionsprozesse für verschiedene IL-4-Funktionen in vivo zu untersuchen. Hierzu sollen die bereits in Zelllinien nach Transfektion charakterisierten gezielt mutierten IL-4R-Varianten mittels bicistronischer retroviraler Vektoren in Zellen aus IL-4R-Knockoutmäusen eingebracht werden. Nach Sortierung GFP-positiver Zellen sollen diese in vitro oder nach Retransfer in IL-4R-/-Mäuse in vivo untersucht werden. Bei der Expression von IL-4R-Varianten in hämatopoetischen Stammzellen aus dem Knochenmark ist nach Transfer in bestrahlte IL-4R-/-Mäuse die Analyse aller Immunzelltypen möglich. Die Expression von IL-4R-Mutanten in primären naiven CD4-positiven IL-4R-negativen T-Zellen soll insbesondere die Rolle von IL-4R-Signalen bei der Th2-Differenzierung in vitro aufklären. Im Labor von Prof. Locksley sind alle erforderlichen Techniken (insbesondere bicistronischer retroviraler Gentransfer in primäre Zellen der Maus) etabliert sowie IL-4R Knockout Mäuse vorhanden.

近几年来，我们的研究小组开始研究具有动物特征的白细胞介素-4受体（IL-4 R），这对检测细胞增殖信号至关重要。Doppler Pepscan-Analysen、Yeast-Two-Hybrid-Klonierung和Coimmunopräzipitationen wurden drei bislang nicht beschriebene IL-4R-Signaltransduktionsoftimert，die mit den entsprechenden Domänen interagieren.这些研究项目旨在探讨IL-4受体的结构域和信号转导过程与体内IL-4功能的关系。在Zelllinien中，通过IL-4 R-敲除韦尔登，可将IL-4 R-变异体的转移特征与双阳性逆转录病毒载体结合。GFP阳性的Zellen在体外分选或在体内IL-4 R-/-Mäuse中的再转移可使韦尔登获得成功。在通过Knochenmark表达IL-4 R-变体的hämatopoetischen Stammzellen中，IL-4 R-/-Mäuse的转移被阿勒免疫类型分析。IL-4 R-突变体在初次免疫的CD 4阳性和IL-4 R阴性的T-Zellen细胞中的表达研究了IL-4 R-信号在体外Th 2分化中的作用。在Locksley教授的实验室里，所有的研究都是关于IL-4 R基因敲除的。