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電離放射線照射によるp53活性化機構におけるMDM2複合体の機能解析

电离辐射照射下MDM2复合物在p53激活机制中的功能分析

基本信息

批准号：
17710045
负责人：
河合秀彦
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17710045/
关键词：
p53 MDM2 MDMX 電離放射線ユビキチン-プロテアソーム

项目摘要

最終年度である本年度はMDM2ファミリー複合体の機能解析を行う目的で以下のとおり実施した。1)MDM2ファミリーを発現した細胞株を用いて、放射線照射などによる影響を解析した。その結果、MDM2によって分解されないMDMXやMDMXのRing-Finger-Domain(RFD)のみを発現した細胞では、正常時にpS3の発現の上昇、MDM2量の増加が見られ、放射線などに対しするP53のストレス応答能が著しく低下する傾向が観察された。2)MDM2-MDMX複合体に結合するタンパク質として14-3-3が同定された。また正常時と放射線照射などのストレス応答におけるMDMXのリン酸化状態に依存して14-3-3に対する結合力が変化する事によって、MDMXの細胞内局在や安定性が制御され、最終的にはP53の制御を行っている可能性が示唆された。3)ストレス非存在下、存在下におけるP53の機能制御を行うユビキチン化酵素としてのMDM2及びMDMXのRFD複合体の機能解析を行う目的でp53にMDM2とMDMXのRFDを結合させたキメラタンパク質と、MDM2とMDMXのキメラタンパク質を用いてMDM2-MDMX複合体のユビキチシ化酵素としての機能解析を行った。4)最終的には、MDM2、MDMXまたはMDM2-MDMX複合体のユビキチン化プロテアソーム分解に必要な領域は、MDM2のRFDのみであるのに対し、p53の分解に必要な領域はMDM2のRFDに加えてNDN2のAcidic-Domain及びMDM2-homo又はMDM2-MDMX-heteroのRFD-complexが必要である可能性が示唆された。以上の結果から、MDM2ファミリーが複合体老して機能し、P53のストレス応答を制御していると考えられる。

The final year is the year MDM2 was launched and the functional analysis of the complex was carried out with the following objectives 1) Analysis of the effects of MDM2 radiation exposure on the development of cell lines. As a result, MDM2 protein decomposition in MDMX and Ring-Finger-Domain(RFD) in MDMX cells was observed, pS3 protein expression increased under normal conditions, MDM2 protein levels increased, and P53 protein activity decreased with radiation exposure. 2) The MDM2-MDMX complex binds to the protein 14-3-3. In addition, the stability of MDMX and the possibility of P53 inhibition in the intracellular structure of MDMX were also discussed. 3) In the absence and in the presence of MDM2, the functional control of P53 is carried out. The functional analysis of MDM2 and MDMX RFD complex is carried out. 4)Finally, MDM2, MDMX and MDM2-MDMX complexes are required for the decomposition of the MDM2-MDMX complex. The necessary domain for the decomposition of MDM2-MDMX complexes is required for the RFD of MDM2. The necessary domain for the decomposition of p53 is required for the RFD of MDM2. The addition of NDN2 Acidic-Domain and MDM2-homo is also required for the RFD-complex of MDM2-MDMX-tero. The above results show that MDM2 can be used to control complex functions, and P53 can be used to control complex functions.