Mechanistic analysis of lymph node metastasis using gastric and colonic cancer cell lines tagged with GFP

GFP标记的胃癌和结肠癌细胞系淋巴结转移的机制分析

基本信息

批准号：
18590394
负责人：
NAKANISHI Hayao
金额：
$ 2.71万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

胃がん、大腸がんの予後を規定する最も重要な因子であるリンパ節転移の機構を解明するため、臨床病理学的ならびに実験的に腫瘍リンパ管新生について検討し、以下の諸点を明らかにした。1)消化器がんにおける腫瘍リンパ管新生のin vivoにおける実態を明らかにするためにリンパ管内皮特異抗体D2-40を用いて胃癌50例、大腸癌61例のリンパ管新生を免疫組織学的に検討した。その結果、いずれの腫瘍においてもリンパ管新生は血管新生のように腫瘍組織内では殆ど起こらず、主として腫瘍周囲で起こることを明らかにした。VEGF-Cの発現はこれとよく一致して周囲正常上皮に比べ腫瘍細胞でむしろ減少傾向が認められたことから、リンパ管新生はVEGF-Cが既存のリンパ管に作用して誘導される可能性が示唆された。2)次にこれら臨床例の腫瘍リンパ管新生に関する観察結果を実験的に検証するためにGFP遺伝子を導入した胃癌、大腸癌リンパ節転移細胞株とmicrolymphangiographyを組み合わせて腫瘍リンパ管新生をヌードマウス皮下移植系で実験的に解析した。その結果、上記臨床例の観察結果とよく一致して、リンパ管新生は腫瘍組織内ではなくむしろ腫瘍周囲の既存のリンパ管で起こり、腫瘍細胞のリンパ管侵襲も腫瘍辺縁部で起きている可能性が示唆された。3)VEGF-Cのリンパ節転移における役割を明らかにするため、リンパ節非転移性で、VEGF-C低発現ヒト大腸癌細胞株にVEGF-Cを強制発現させた安定発現株ではリンパ節転移の有意な促進は見られなかった。一方、リンパ節転移能を有し、VEGF-Cを高発現するヒト大腸癌細胞株にVEGFC ShRNA plasmidベクターを導入した安定発現株ではリンパ管密度ならびにリンパ節転移能が軽度ながら抑制されたことから、リンパ節転移能の獲得にはVEGF-Cを介したリンパ管新生だけでは十分ではなく、腫瘍のリンパ管侵襲能も関与している可能性が示唆された。4)腫瘍細胞とリンパ管との相互作用を解析するためにHPVE6,E7およびhTERT遺伝子を導入して作成したヒト不死化リンパ管内皮細胞株(HuTLEC)および上記大腸癌リンパ節転移細胞株(COLM-5)を組み合わせて構築したin vitro解析システムを用いて、COLM-5細胞の培地中にVEGF-C刺激に比べ数倍高い転写活性をluciferase assayで検出し、VEGF-C以外の新しい管腔形成促進因子が存在する可能性を示唆した。

为了澄清淋巴结转移的机制，这是定义胃癌和结肠癌预后的最重要因素，我们在临床和实验上研究了肿瘤淋巴管生成，并揭示了以下几点。 1）为了阐明消化癌中肿瘤新血管形成的体内状态，我们使用了淋巴内皮特异性抗体D2-40进行免疫组织化学检查，以检查50种胃癌和61个结肠癌的新生血管化。结果，可以发现在任何肿瘤中，淋巴管生成很少发生在肿瘤组织中，例如血管生成，但主要发生在肿瘤周围。 VEGF-C的表达与此相一致，与周围正常上皮相比，肿瘤细胞的降低表明淋巴管生成可能是由于VEGF-C对现有淋巴管的作用而引起的。 2）接下来，为了实验验证这些临床病例中有关肿瘤淋巴管生成的观察结果，使用胃癌和结肠癌淋巴结细胞的结合，使用裸小鼠皮下植入系统对肿瘤淋巴管生成进行了实验分析。结果表明，在与上述临床病例的观察结果非常吻合时，新血管形成不发生在肿瘤组织中，而是在肿瘤周围的现有淋巴管中发生，并且肿瘤细胞的淋巴侵袭也可能发生在肿瘤的边缘。 3）为了阐明VEGF-C在淋巴结转移中的作用，在稳定的表达菌株中没有明显促进淋巴结转移，这些转移是非转移性的，并且被迫在VEGF-C中低的人类结肠癌细胞系中表达VEGF-C。另一方面，在稳定的表达应变中，将VEGFC shRNA质粒载体引入具有淋巴结转移潜力和VEGF-C高表达的人类结肠癌细胞系，淋巴管道密度和淋巴结转移性的潜在受到了较小的溶解型溶解型的溶解度，这表明该溶剂的溶解度不足以弥补溶剂。肿瘤的淋巴浸润能力也可能涉及。 4) Using an in vitro analysis system constructed using a combination of the human immortalized lymphatic endothelial cell line (HuTLEC) created by transfecting the HPVE6, E7 and hTERT genes and the above-mentioned colon cancer lymph node metastatic cell line (COLM-5), we detected transcriptional activity several times higher than VEGF-C stimulation in the medium of COLM-5 cells using luciferase测定，表明除了VEGF-C之外，新的成型启动子其他因素可能存在。