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ヒト人工染色体を用いた脆弱X症候群のCGGリピート伸長機構の解析系の構築

利用人类人工染色体分析脆性X综合征CGG重复扩增机制的系统构建

基本信息

批准号：
18810020
负责人：
中山祐二
金额：
$ 1.74万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

平成19年度は、平成18年度に引き続き、変異レベルにまで延長したCGGリピートを持つ脆弱X症候群(FXS)患者由来のX染色体を、染色体ドナー細胞として最適なマウスA9細胞へ、そして染色体改変の場として最適なニワトリDT40細胞へと順次導入し、人工染色体構築のための基盤資材を作製する過程が中心であった。しかし、ニワトリDT40細胞への導入が未だ成功していない。そこで同じトリプレットリピート病である、DRPLA(歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症)の原因遺伝子ATN1のリピート領域を対象として、系の妥当性を検討し、かつ、DRPLAの領域においても、同様のリピート伸長解析系を確立することを目指した。本研究において、劣性遺伝のFXSとは異なり、優性遺伝するDRPLAのモデルを作成することは、マウス個体において、より明確な表現型が出やすいという可能性では優位性がある。平成18年度:ヒトFXS患者由来のX染色体を一本保持するマウスA9細胞の作製目的のマウス細胞は得られ、染色体改変のステップに進んだ。平成19年度:X染色体FMR1領域のHAC搭載に向けた染色体改変ヒトFXS患者由来のX染色体が、染色体改変の場であるニワトリDT40細胞に移入できず、系のコントロールとして、DRPLA患者の皮膚細胞から、ATN1遺伝子領域の変異CAGリピートを含む12番染色体をマウスA9細胞にクローニングした。また、正常ヒト12番染色体はコントロールとして、すでにニワトリDT40細胞に移入した。これらの系から、X染色体に関しては何らか(おそらくセレクション)の理由で染色体導入がうまくいかなかったが、常染色体では、系が確かであることが示された。今後は、DRPLAのリピート領域を用いたトリプレットリピート解析系の構築を検討し、人工染色体導入マウスを用いたトリプレットリピート解析系の構築を目指していく。FXSのCGGリピートに関しては、個体がない限り、メチル化の状態、FMR1の不活性化のメカニズムと時期の解析ができないので、条件検討を重ね、再度、研究の継続を進めていく価値はある。そして、CAGとCGGリピート両方のリピート間でのリピート伸長、あるいは病態に関わる知見が得られるようなin vitroあるいはin vivoの系を確立することが肝要である。

Heisei 19 year は, Heisei 18 year に lead き続き, 変different レベルにまで extension したCGG リピThe origin of Fragile X Syndrome (FXS) patients The most suitable A9 cells are the optimal ones, and the optimal ones are the optimal NANO DT40 cells, which are suitable for the chromosome modification field. The basic materials and materials for constructing artificial chromosomes are introduced sequentially and the manufacturing process is centered on them. The introduction of しかし and ニワトリDT40 cells was not successful yet.そこで同じトリプレットリピート disease である, DRPLA (red nucleus pallidum pallidum atrophy), the cause of the remaining child ATN1 のリピート fieldを対肖として、system of appropriateness を検问し、かつ、DRPLAの区においても、同様のリピート elongation analysis system をestablished することを目した. This research is done by FXS with inferior characteristics and FXS with superior characteristics by DRPLA with superior characteristics.ことは, マウス individually において, よりclear なphenotype が出やすいというpossibility では dominance がある. Heisei 18: The origin of FXS patients is the X-chromosome, which is produced by maintaining the A9 cells, and the chromosome modification is carried out. FY2019: The X chromosome FMR1 field is equipped with HAC to carry out the chromosome modification and transplantation of DT40 cells into the chromosome modification field of FXS patients. , Department of skin cells of DRPLA patients, ATN1 genetic subfields The original CAG リピートをcontaining 12th chromosome is a をマウスA9 cell.また, normal ヒト12th chromosome はコントロールとして, すでにニワトリDT40 cells were transplanted into した.これらの线から、 Chromosome import がうまくいかなかったが, autosomal では, line がOK かであることが Show された. In the future, DRPLA's field of research will be discussed with the construction of the analysis department of DRPLA.し, Artificial chromosomes were introduced into MASHIBA using the いたトリプレットリピートanalytical system constructed by していく. FXS のCGG リピートに关しては, individual がないlimit り, メチル化のstate, FMR1 のactivation のメカThe analysis of the period of ニズムとができないので, the condition 検question を重ね, again, the research の継続を进めていく価値はある.そして、CAGとCGGリピート両方のリピート间でのリピートStretch, あるいは morbid に关わる知见が得られるようなin The in vitro system is established in vivo and the liver system is established.