新規機能に着目した細胞周期制御因子サイクリンの機能解析

细胞周期调节因子细胞周期蛋白的功能分析，重点关注新功能

• 批准号: 18870013
• 负责人: 三村 覚
• 金额: $ 1.74万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18870013/
• 关键词: 細胞周期; CDK; サイクリン; 蛋白質リン酸化

真核生物の細胞周期はCDK (cyclin dependent kinase)の活性により制御されている。CDKのキナーゼ活性は制御因子であるサイクリンの結合によって活性化される。CDKのリン酸化サイトの共通配列はごく単純なS/TPXK/Rであり、実際にin vitroでは多数の基質蛋白質をリン酸化することが報告されている。しかし、CDKの細胞内での直接の標的分子は不明な部分が多い。私はこれまでに、出芽酵母のサイクリンであるClb2が基質であるCdc6とリン酸化依存的に結合することを見いだした。本研究はこのサイクリンの新規機能に着目して、サイクリンとリン酸化依存的に結合してその活性が調節されているCDK基質を探索することにより細胞周期研究に貢献するものである。まず、出芽酵母ツーハイブリッド系を用いて、出芽酵母Clb2に結合する蛋白質の単離を試みた。野生型CLB2遺伝子をbaitに用いた場合、細胞増殖をほぼ抑制してしまうことがわかったので、CDKと結合できないが、リン酸化依存的結合は可能なKAEAFA変異体をbaitに用いたところ、10数種の候補遺伝子を単離することができた。そのうちのいくつかは、CDKのリン酸化サイトを有しており、実際にin vitroでCDKによってリン酸化されることが報告されているものであった。今後はこれらの候補蛋白質で、Clb2とリン酸化依存的に結合するものがあるかどうか調べていく予定である。高等真核生物でもサイクリンにリン酸化依存的に結合する蛋白質を同定する目的で、レトロウイルス発現系を用いて野生型サイクリンB1、あるいは、リン酸化依存的結合のない変異型サイクリンB1を恒常的に発現する細胞株を得ることに成功した。今後はこれらのサイクリンに結合する蛋白質を生化学的に単離し質量分析を用いた同定を行っていく予定である。

In eukaryotes, cell cycle CDK (cyclin dependent kinase) is active in the control of eukaryotes. The activity of CDK was determined by the combination of the control factor and the activation factor. CDK, acidify, acid, acidify, acidify, acid, acid, There are many "unknown" parts of the molecules that are not known to be directly expressed in the cells of CDK cells. The combination of yeast germ, yeast budding, Clb2 gene, Cdc6 gene, acidification-dependent acid, and so on. The purpose of this study is to improve the effectiveness of the new specification in the study of acidification-dependent biosynthesis in combination with active CDK. The purpose of this study is to explore the cell cycle research. Yeast budding and budding yeast were used in the isolation test of Clb2 protein in combination with budding yeast. The combination of wild-type CLB2 spores, wild-type bait, wild-type bait, and the inhibition of wild-type bait, cell colonization, and acidification dependence may lead to the isolation of more than 10 candidate strains. There are some problems in the acidification process, such as CDK, CDK, acid, CDK, acid, acid and acid. In the future, we need to know that protein and Clb2 are acidified and dependent on acidification. In higher eukaryotes, the protein is acidified by the same purpose, and the wild-type cell line is successfully obtained by combining the wild-type gene B1, wild-type protein B1, wild-type eukaryote, eukaryotes, eukaryotes and eukaryotes. In the future, the quantitative analysis of protein biochemistry in combination with protein biochemistry will be carried out in the same way.